多聚酶链式反应扩增DNA片段教学课件.pptVIP

课题2　多聚酶链式反应扩增DNA片段 课程标准 尝试PCR技术的基本操作和应用。 课标解读 1.理解PCR技术的基本原理。 2.知道PCR技术的基本操作过程。 3.讨论PCR技术的应用。 1．生物体内DNA分子复制的条件 (1)四种 是合成子链的原料。 (2) 提供了DNA复制的模板。 (3) 打开了DNA双链。 (4) 催化合成DNA子链。 (5) 使DNA聚合酶能够从 开始连接脱氧核苷酸。 2．PCR扩增的原理及条件 (1)概念 PCR即 ，是一种 迅速 的技术。它能以极少量的 为模板，在短时间内复制出上百万份的 。 (2)原理 ①DNA的热变性：在 的温度范围内，DNA双螺旋结构解体，双链分开，这个过程称为 。当温度缓慢 后，两条彼此分离的DNA链又会重新 。 ②子链的合成：a.需要 ；b.合成方向总是从子链的 端向 端延伸。 (3)条件 ① 模板。 ②分别与模板DNA两条模板链相结合的两种 。 ③A、T、G、C四种 。 ④耐热DNA聚合酶，一般用 。 ⑤需要一定的 和能严格控制 的温控设备。 3．PCR反应过程 PCR一般要经历 次循环，每次循环可以分为 、 和 三步。 (1) ：当温度上升到 以上时，双链DNA解聚为单链。 (2) ：温度下降到 左右， 通过 与两条单链DNA结合。 (3) ：温度上升到 左右，溶液中的四种脱氧核苷酸在 的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA 链。 [思维激活1] DNA复制缘何必须有引物？ 提示　DNA聚合酶不能从头合成DNA，而只能以3′延伸DNA链，故DNA合成时，必须加入引物(其3′游离)以作为延长DNA子链的“引子”。 1．细胞内DNA复制和细胞外PCR扩增的比较(见下表) 2.PCR过程 (1)变性 当温度上升到90 ℃以上时，双链DNA解聚为单链。 (2)复性 温度下降到50 ℃左右，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。 (3)延伸 温度上升到72 ℃左右，溶液中的四种脱氧核苷酸(A、T、C、G)在DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。 特别提醒　(1)72 ℃左右时，TaqDNA聚合酶有最大活性，可使DNA新链由5′端向3′端延伸。 (2)DNA聚合酶只能特异性地复制处于两个引物之间的DNA序列，使该段固定长度的序列呈“指数式”扩增。 【巩固1】 标准的PCR过程一般分为变性、复性、延伸三大步，这三大步需要的温度依次是 (　　)。 A．94 ℃、55 ℃、72 ℃ B．72 ℃、55 ℃、94 ℃ C．55 ℃、94 ℃、72 ℃ D．80 ℃、55 ℃、72 ℃ 解析　当温度上升到90 ℃(90～96 ℃)以上时，双链DNA解聚为单链，称之为变性；当温度下降到50 ℃(40～60 ℃)左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合；当温度上升到72 ℃(70～75 ℃)时，溶液中的四种脱氧核苷酸在Taq DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链，称为延伸。 答案　A 1．实验用具 (1)PCR仪：该仪器能自动调控 ，实现DNA的扩增。如果没有PCR仪，可用3个 代替，操作时按程序在3个 中 PCR反应的微量离心管。 (2)微量离心