溶菌酶晶体形貌的原子力显微成像观测 afm observations of lysozyme crystals surface morphology.pdfVIP

第27卷第1期 电 子显微学报 V01．27．No．1 2008年2月 ofChineseElectron 2008．02 Journal Society Microscopy 文章编号：1000．6281(2008)os．0064．03 溶菌酶晶体形貌的原子力显微成像观测 刘玉红，于 泳+，康琦 (中国科学院力学研究所微重力实验室，北京100080) 摘 要：为研究蛋白质晶体的生长机理，采用气相扩散法制备溶茵酶晶体，使用原子力显微成像技术观测了溶茵 酶晶体(10S)生长面的形貌。发现溶茵酶晶体(S01)面生长呈现螺旋位错的特征，其台阶平均高度为2．9nnl，相当于 单分子层的厚度。而以前在高过饱和度条件下得到的溶茼酶晶体的AFM图像显示为二维成核生长机理，其台阶 高度为双分子层的厚度5．6nlTl。这说明气相扩散法制备蛋白质晶体时，由于溶液的过饱和度较小，溶茵酶在溶液 中可能不形成多聚物而是以单个分子的形式结合到晶体上，即(S01)面的主要生长单元并非具有43螺旋结构的四 聚体，而是溶茵酶单分子。这一结果为蛋白质晶体生长机理的探索提供了实验依据，是对溶茵酶晶体生长单元认 识的补充。 关键词：蛋白质晶体；溶茵酶；原子力显微镜；气相扩散法 中图分类号：078；TGll5．2l+5．7文献标识码：A 在分子生物学和药物学研究中，x．射线晶体衍 本文用气相扩散法制备溶菌酶晶体，用原子力 射方法是测定分子结构模型的主要手段。经近十多 显微成像技术观测了晶体的(101)面表面形貌，研究 年的发展，其相关实验技术和结构测定技术已趋完 了气相扩散法制备的溶菌酶晶体的生长机理。 善。而该方法成功的前提是要获得大体积且高质量 1材料与方法 的蛋白质晶体样品。相比之下，如今仍缺少能指导 蛋白质结晶实践的理论和技术。因此，如何制备大 N046F． 用结晶级的Sigma(Cat，NoL6876，Lot 体积且高质量的单晶是使用x一射线衍射法测定蛋 80601)鸡蛋清溶菌酶配制30 mg／ml溶菌酶溶液(未 白质分子三维结构的瓶颈。蛋白质晶体的生长是一 mmol／L， 做进一步的纯化处理)。在HAC．NaAC(50 个受多因素影响的，复杂的物理化学过程。其中，如 mol／LNaCl溶液为沉淀 pH=4．7)缓冲条件下，以1 浓度、温度、pH值、沉淀剂、流场等和人们尚未了解 剂，制备池液为1000肛lNaCI溶液。将8一溶菌酶 的其它一些因素，都会影响晶体生长速率、晶形和晶 溶液与NaCl溶液等比例混合，制成16m悬滴，置于 体表面形貌，从而影响最终结果。深入研究蛋白质 20℃恒温箱中静置生长晶体。3天后，取出靶用溶 晶体生长机制，了解和控制这些因素对复杂物理化 AutoPmbeCPResearch 菌酶晶体，用AFM Scanning 学过程的影响，对建立能指导结晶实践的蛋白质晶 Probe Scientific