.中药化学成分的研究的一般方法.pptVIP

（五）结晶法 1、结晶的条件 （1）溶剂： 选择合适的溶剂对结晶的形成是关键。合适的溶剂应对欲分离的成分热时溶解度大，冷时溶解度小，而对杂质则冷热溶解度一致；沸点要适中；不与被分离成分产生化学反应。 选择溶剂依据“相似相溶”原理。 * （2）温度 通常在加温的情况下，溶解过滤，除 杂，浓缩，放冷。最合适的结晶温度 5~10度。 （3）时间 一般3~ 5天或更长时间。 （4）浓度 一般是多一些溶剂，放置使其慢慢挥发 到合适的浓度。 （5）杂质 （6） 有效成分的含量越高，越易结晶。 * 2、结晶溶剂的选择 对所需成分的溶解度随温度不同而有显著差别，同时不发生化学反应；查阅相关文件，参考“相似相溶”规律；选择混合溶剂，低沸点溶剂对物质溶解度大，高沸点溶剂对物质的溶解度小；常用溶剂有甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、石油醚等。 * （六）色谱分离法 1、吸附色谱 利用同一吸附剂对混合物中各种成分吸附能力的差异，而使各成分达到分离目的的色谱方法。 吸附能力的强弱是由吸附剂和被吸附物质的性质决定的。吸附色谱法的分离效果，完全由吸附剂，溶剂和被分离物质的性质决定。 * （1）常用吸附剂： 硅胶：多孔，微酸性，其吸附能力稍弱于氧化铝。 吸附作用是由于颗粒表面有很多硅醇基，它可以和许多化合物形成氢键而具有一定的吸附作用，所以硅胶吸附作用的强弱与硅醇基的含量有关。硅醇基还易吸附水分，吸附的水分越多，吸附其 他化合物的能力越弱。吸水量超过12%就不能做为吸附剂了。 * 当加热到了100-110℃时即可除去绝大多数硅醇基吸附的水分，恢复吸附活力，这一过程称为活化。 当温度上升到500℃时，硅胶表面的硅醇基则脱水缩合转变为硅氧环结构，从而丧失吸附活性。 硅胶适于分离的化合物范围很广泛，但不宜分离碱性化合物。 * * 氧化铝 由氢氧化铝直接在高温下脱水制得，带微碱性，适于分离碱性成分。 聚酰胺 适于分离黄酮、酚、醌类、有机酸及鞣质，可使性质极相近的化合物得到分离。 原理：聚酰胺中的酰胺基可与酚羟基、羧基、羰基、硝基等形成氢键吸附。聚酰胺的吸附容量大。 * 被分离成分的结构与吸附力的关系： 1）可形成氢键的基团数目越多，则吸附能力越强，越难被洗脱。 2）形成分子内氢键的吸附能力会减弱。 3）分子中芳香化程度越高，吸附能力越强。 4）对聚酰胺柱的洗脱能力，与溶剂的种类有关： 甲酰胺，丙酮，甲、乙醇，水依次减弱。 * （2）溶剂 对于极性吸附剂，溶剂极性越大，洗脱能力越强。对于非极性吸附剂，则相反。 （3）被分离物质 对于极性吸附剂，被分离物质的极性越强，吸附力越大，越难洗脱。 * （4）操作方式 （ 1） 薄层色谱： 制板 点样 展开 显色 （ 2） 柱色谱： 装柱 上样 洗脱 收集 浓缩 检识 合并 结晶 * （二）分配色谱 1、基本原理 利用物质在固定相和流动相之间分配系数不同而达到分离。 2、分类 正相色谱：固定相极性流动相极性，用于分离极性和中等极性的成分。 反相色谱：固定相极性流动相极性，用于分离非极性和中等极性的成分 * 3、洗脱规律： 正相色谱中，极性小的化合物先被洗脱，极性大的化合物后被洗脱；反相色谱正好相反。 4、常用的固定相和流动相固定相：正相色谱中常用氰基或氨基键合相； 反相色谱中常用C18或C8键合相。 流动相：正相色谱中主要用有机溶剂； 反相色谱中常用甲醇-水或乙腈-水系统。 * （三）离子交换色谱法 1、基本原理 基于各成分解离度的不同而分离。 2、离子交换剂的种类 离子交换树脂、离子交换纤维素、离子交换凝胶。 3、应用 主要用于生物碱、有机酸及氨基酸、蛋白质、多糖等水溶性成分的分离纯化。 4、操作要点 装柱前要用水充分溶胀，并用酸、碱预处理。 * （四）大孔吸附树脂法 1、性能及分离原理 （1） 性能： 大孔树脂是一种不含交换基团，具有大孔结构的高分子吸附剂。一般为白色颗粒，20~60目。理化性质稳定，不溶于酸、碱及有机溶剂。 水溶液中吸附力较强，且有很好的选择性。 （2）原理 既有吸附性，又有分子筛的筛选性。吸附性是范德华引力或氢键吸附的结果；筛选性则由其多孔性网状结构引起的。 * 2、影响分离的因素 （1） 分子极性的大小 极性较大的化合物适宜于在中极性的树脂上分离，而极性较小的化合物则适于在非极性树脂上分离。 对于中极性树脂来说，被分离化合物分子上能形成氢键的基团越多，吸附力越强。 （2）分子体积的影响 对于非极性大孔吸附树脂而言，化合物体积越大，吸附力越强，这与大体积分子疏水性强有关。 * （3）PH 一般酸性化合物在适当酸性溶液中可被充分吸附，碱性化合物