实时荧光定量PCR技术在食品检验中的应用.PDFVIP

江苏预防医学 2006 年 12 月第 17 卷第 4 期 　J iangsu Prev Med , December ,2006 ,Vol 17 ,No4 ·85 · ·综述与讲座 · 实时荧光定量 PCR 技术在食品检验中的应用 沈赟 ( 江苏省疾病预防控制中心 , 　江苏 南京 　2 10009 ) 　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　　【文献标识码】　C 　【中图分类号】　R 1555 　【文章编号】　1006 - 9070 (2006) 04 - 0085 - 02 【关 键 词 】　实时荧光定量 PCR ;食品检测 ;转基因食品 　　实时荧光 定量 PCR ( realtime quantit ative PCR 整个过程完全是封闭式操作 ,避免了普通 PCR polymera se chain reaction , RQPCR) 又称荧光定 过程中的污染[2 ] 。 量 PCR , 1994 年由日本科学家 Higuchi 提出。当 1 个 RQPCR 过程一般仅耗时 20 ～120 min , 时因为想实时地看到 PCR 反应的整个过程 ,就在普 尤其是近年来用毛细硅管代替离心管 ,用光加热取 通 PCR 仪的基础上配备了一个激发和检测的装置 , 代半导体加热后 ,对 PCR 混合物的加热时间可缩短 在 PCR 反应的退火或延伸阶段检测掺入到双链核 1～15 s 。另外 ,扩增结果的检测不需要在扩增期间 酸中 EB 的含量 ,实时监控 PCR 反应的进程 。按照 取样 ,也节省了大量的时间[ 3 ] 。部分实时荧光定量 PCR 反应的数学函数关系 ,结合相应的算法 ,加入 PCR 仪 ,可安装 384 孔平板 , 24 小时连续工作 ,非 相应的内对照 ,对待测样品中的目标基因进行准确 常适用于进行高通量的研究 。 定量 。这样第一台实时定量 PCR 仪就诞生了。而 2 　RQPCR 在食品检测中的应用 真正市场化的荧光定量 PCR 仪是在 1996 年推出 , 2 . 1 　食物加工过程中外源 DN A 污染的定量 该技术在常规 PCR 的基础上运用荧光共振能量转 ( 1) 病原微生物的检测 :食源性疾病的发病率 移技术 ,把核酸扩增 、杂交 、检测等技术结合在一起 , 居各类疾病总发病率的第二位 ,微生物污染是食源 在 PCR 指数扩增期间通过连续监测荧光信号的强 性疾病最主要的原因。随着人们对食品安全认识的 弱来即时测定特异性产物的量 ,据此计算待检样品 提高 , 对食源性微生物 的检测越来越受到重视 。 中目的基因的拷贝数 。定量 PCR 技术自产生以来 , PCR 技术的出现使我们能够快速 、方便地检测病原 不断发展完善 ,到 目前为止已经非常成熟 。标记方 体 。由于其灵敏性高 ,所以实验过程中很容易受到 法由最初单一的染料法 ,发展到特异性更高的探针 污染而出现假阳性 ,因此普通 PCR 并不作为诊断的 法 ,如 Taqman 、Molecular Beaco n 、Fret 等不同方 “金标准”。RQPCR 具有极高的灵敏度和特异性 , 法的标记探针 ,其中由于 Taqman 探针的广泛使用 , 所以自问世以来 , 已广泛应用于食源性微生物的检 实时定量 PCR 的方法也称为 Taqman 法 。目前实 测 ,并可以定量致病菌污染的程度 。例如在葡萄中 时荧光定量 PCR 已广泛应用于生物 、农业 、医学等 常有 曲霉菌 的污染 , 产生 的赭 曲霉素具有毒性 ,