螺旋藻耐盐相关基因启动子区功能分析.PDF

HEREDITAS (Beijing) 2011 10 , 33(10): 1134―1140 ISSN 0253-9772 研究报告 DOI: 10.3724/SP.J.1005.2011.01134 螺旋藻耐盐相关基因启动子区功能分析 1 1 1 1 1 1 2 1 1 2 李姗姗 , 雍静茹 , 齐云玲, 章颖, 赵亮 , 夏士林, 李东 , 王慧利, 包其郁 , 李佩珍 1. , 325000; 2. , 325000 文章利用绿色荧光蛋白基因作为报告基因, 研究2 个螺旋藻耐盐相关基因启动子区域的功能。通过启动 子预测软件预测螺旋藻耐盐相关基因5′端非翻译区的启动子结构, 用Primer3.0 程序在线设计引物, 以pMD18-T 载体和pUC18 载体克隆螺旋藻启动子序列、gfp 和卡那霉素抗性基因, 将螺旋藻启动子-GFP基因-卡那霉素抗性 基因(pro -gfp-kanr r ) 三联DNA 片段克隆至pKW1188 载体, 并将该重组质粒pKW1188::pro ::gfp ::kan 转化至受体菌 集胞藻6803, 激光共聚焦显微镜观察不同盐浓度培养条件下、不同时间段集胞藻表达GFP 的情况。结果显示, 通 过不同盐浓度和不同时间的诱导, 2 个螺旋藻启动子在0.4~0.6 mol/L NaCl条件下, 培养6~8 h表达的绿色荧光蛋 白最多。文章成功构建了以绿色荧光蛋白为报告基因、卡那霉素抗性基因为选择标记、集胞藻6803 作为外源 基因表达受体, 进行螺旋藻耐盐相关基因功能研究的平台; 另外, 从螺旋藻启动子能被盐诱导大量表达GFP 的 结果看, 与启动子相关的螺旋藻基因很可能与螺旋藻的耐盐性相关。 绿色荧光蛋白; 螺旋藻; 启动子; 集胞藻; 耐盐相关基因 Functional analysis of promoter fragments of salt-tolerance related genes in Spirulina 1 1 1 1 1 LI Shan-Shan , YONG Jing-Ru , QI Yun-Ling , ZHANG Ying , ZHAO Liang , XIA 1 2 1 1 2 Shi-Lin , LI Dong , WANG Hui-Li , BAO Qi-Yu , LI Pei-Zhen 1. School of Labtory and Life Science, Wenzhou Medical College, Wenzhou 325000, China; 2. Biological Experiment Teaching Center of Wenzhou Medical College, Wenzhou 325000, China Abstract: I