压电免疫质量传感器中生物大分子的固定化方法.PDFVIP

第27卷 分析化学 (FFNXIHUAXUE)评述与进展 第4期 1999年4月 ChineseJoumalofAnal州calChemistry 479~484 压电免疫质量传感器中生物大分子的固定化方法 许 博 朱果逸 ‘ (中国科学院长春应用化学研究所电分析化学开放研究实验室，长春130022) 摘 要 评述了近十几年来压电免疫质量传感器研究中的关键技术— 生物分子固定化方 法的研究应用，并对固定化方法的发展予以展望。 关键词 压电质量传感器，免疫分析，生物传感器，固定化方法，评述 1 引 言 在众多的化学和生物传感器中，压电质量传感器以其独有的特点已经崭露头角，应用于很 多方面。压电传感器的最大特点就是检测质量的灵敏度高，可以达到纳克(ng)级，甚至10-2 克(P9)级;而且信息直观，应用于生化研究方面不需要标记，可以不分离样品，操作简便、快速， 还易于联机、实现实时自动化监测((,)。因此，其在生物传感器的研究中日益受到重视。 压电质量传感器对质量变化的灵敏度高，但通常对振荡晶片表面上任何负载或卸载的物 质都有响应，而无选择性。另一方面，许多生化反应都是特异性反应，选择性比较高，如抗原- 抗体反应、补体反应、DNA杂交等。因而，压电免疫质量传感器就是将这二者相结合而产生的 新型生物传感器。其中，生物分子识别层的构造(即生物分子的固定化)技术就成为压电免疫 传感器的关键之一。本文将介绍此类传感器的生物分子固定化方法和技术。 2 压电质量传感器原理简介 压电质量传感器通常又称为石英晶体微天平(QCM)。它的理论基础是1880年居里兄弟 发现的逆压电效应。1959年，Saueberay发现石英晶体的谐振频率变化值与晶体表面物质的质 量变化呈线性关系，即: Af二一瑞Am/A(p,p,)z二一2.26x10一f‘,Am/A 其中，Am为晶片的质量变化值，A为有效压电面积，A为晶片的基频，负号表示质量的减(增) 会引起频率的升(降)。这就是压电传感器最常用的方程— Saueberay方程2)〔01983年，Roe- de:和Bastiatuis首次报道了石英晶体微天平成功地在液相中的起振(3)，实现了石英晶体微天平 技术的一个重大突破，从而开辟了其在液相环境研究的新领域，也更有利于进行生命体活动的 研究。免疫分析、DNA探针以及细胞生长的监测等许多方面的研究都应用了这项技术。这 样，压电免疫传感器很快成为生物传感器的研究热点之一。 3 生物分子固定化方法及技术 免疫反应闭有多种多样，参与反应的分子种类更多。这就决定了其在振荡晶片表面的固 1998-06一收稿;1998-08一接受。 480 分析化 学 第27卷 定化形式有很多种。这些固定化过程也是一种电极表面的修饰过程。但它又有自身的特殊要 求，即:修饰层粘弹性越低越好(理想状态是刚性层)，生物相容性好，减少非特异性吸附等。我 们按照特异性生化反应体系是否直接固定于晶片的电极表面而将它们分为直接固定法和间接 固定法两大类。 3.1 电极材料 由于固定化层的形成与电极材料、电极表面状态的关系密切(受温度、溶液性质等因素的 影响)。因此，在介绍固定化方法之前先简单介绍压电免疫传感器中石英晶片表面所采用的电 极材料。目前，常用的电极材料有Au,掩,Pt,Pd(PdO),Al等，碳电极的研究应用也有报 道，一〔’〕。在此类传感器中，由于固定化过程首先是在石英晶片的电极表面(以下简称电极或电 极表面)上进行的，因此在许多情况下，不同的电极材料决定了不同的固定化方法。如金电极 最适合于硫醇分子形成SAM，另外金电极还易于吸附蛋白质，故可用于直接固定蛋白大分子; 铅 、铝等的表面易于氧化并形成富含一OH的活性表面，有利于实现硅烷化法等间接方法。因 此 电极材料的选择是比较重要的。 3.2 直接固定法 一般是将电极用含生物分子的溶液涂覆或浸泡，从而使电极表面生成具有识别功能的生 物膜。Harteveld等(al等通过物理吸附作用在镀金晶片表面固定上葡萄球菌肠毒素B(SEB)，用 抗原抗体竞争反应法来检测SEB含量。Eb