蛋白质的测定方法k9860凯氏定氮仪..doc

粗蛋白的测定（K9860凯氏定氮仪） 一、实验目的：掌握常见饲料原料、饲料及样品中粗蛋白的测定方法。 二、实验原理：各种饲料的有机物质在还原性催化剂（如硫酸铜、硫酸钾、硫酸钠或硒粉）的帮助下，用浓硫酸进行消化作用，使蛋白质和其它有机态氮都转变成NH4+并与浓硫酸化合成硫酸铵，而非含氮物质，则以CO2、H2O、SO2状态逸出。消化液在浓碱的作用下进行蒸馏，释放出铵态氮，用硼酸溶液吸收之并与之结合成为四硼酸铵，然后以甲基红-溴甲酚绿混合作指示剂，用HCl标准溶液（0.1 mol/l）滴定，求出氮的含量，根据不同的饲料再乘以一定的系数（通常用6.25计算），即为粗蛋白的含量。 三、实验试剂： 1. 溴甲酚绿四、1 检查仪器 1.1检查瓶盖是否旋紧，必须确认不漏气、不漏液； 1.2检查进出水、排液管道是否通畅； 1.3在整个测试过程中，若仪器出现异常，应立即暂停操作。 2 开机 开机前必须先打开冷凝水开关，然后打开电源开关。 3调试开机后的界面上会显示“调试、测试、查询”字样，光标默认在“调试”，按“确定”键进入“调试”状态。 3.1 按“选择”键选中“滴定”，然后“确定”，让机器吸滴定用的盐酸润洗管道及排除其中的空气（非常重要），约需45-50秒，然后选择“排液”，重复2-3次。注意观察吸收瓶里的加入量（下拉把手即可看见）。 3.2 按“选择”键中“硼酸”，让机器吸硼酸润洗管道，约需3-4秒，然后选择“排液”，重复2-3次。注意观察吸收瓶里的接入量（下拉把手即可看见）。 注意：盐酸用量较少，硼酸可多用点，先盐酸后硼酸。4 检测 选择“测试”（或者从菜单上面通过“选择”键，选择“测试”，然后“确定”），进入样品测试。 4.1 空白值：每次开机测一批样品，都要测系统空白值。做法如下：放上干净的空消化管，密封好。设置好参数后，选择“测试”，机器会自动进行测试。更换消化管，重复几次，待测值稳定后（盐酸变化值在0.05ml范围内较好），算出盐酸标定的平均值，即为空白值。做此空白值是为了消除系统误差。 4.2 设定参数：设定参数如下，样品重量为；滴定酸摩尔数为0.1mol/L；蛋白转换系数为6.25；空白值（设为4.1所测定的值）；定标系数为系统默认。 4.3 硫酸铵的含氮量为21.19±0.2%21.19±0.2%内为止。 4.4 测定：按“确认”键开始测定，机器将自动依次进行“排液、加硼酸、加碱、蒸馏、滴定、排液”过程。“滴定”结束后，系统将自动打印结果。“排液”结束后，光标处于“继续”位置。 4. 取下消化管，换上下一个样品，重复步骤4.2和4.3，继续测定。5 关机 5.1 关闭电源，将消化管取下，换上一根干净的空消化管，密闭好。 5.2 将机身、消化管仓、试剂仓和机器周围桌面反复擦洗，清理干净。 5.3 用洗衣粉将消化管洗涤干净，最后用蒸馏水润洗后放到60℃烘箱中烘干，收到消化管架中。注意：消化管价格昂贵，洗的时候要轻拿轻放。 五、注意事项： 5.1开机前必须打开冷凝水开关。 5.2仪器使用前要首先确定蒸馏水桶内水量是否充足，如水量不足请加入足量蒸馏水，以免影响仪器正常使用。5.3仪器的内部存储器按样品编号存储的，因此用户应注意样品编号的设置，存储器是循环使用的，样品编号范围是1-1000，请不要轻易修改样品编号。 5.4在配制碱液、酸液的过程中要小心操作，以免被化学试剂灼伤。 仪器中有玻璃器皿，因此在搬运过程中，需要当心。 在需要修理仪器内部部件时，一定要关机并拔掉电源线，同时等待蒸馏系统冷却下来。 排废液的管路的出口要比仪器安放的高度要低，以使排液畅通。 仪器长时间不用时，应将碱液桶中的碱液倒掉，并加入清水；将消化管装上，手动加碱，将管路中的碱液加到消化管中，并用清水清洗管路，防结晶堵塞。 为保证测试结果的准确，仪器每次开机后先做一个空白样品，用以清洁仪器管路。 消化管内最大溶液体积不超过消化管体积的2/3。