分析实验报告高效液相色谱.docVIP

华南师范大学实验报告 学生姓名：杨秀琼 学号： 20082401129 专业： 化 学 年级班级：08化二 课程名称：仪器分析实验 实验项目：液相色谱分析混合样品中的苯和甲苯 实验类型：综 合 实验时间：2010/416 实验指导老师 曹立娟老师 实验评分： 一、[实验目的: 1、掌握高效液相色谱定性和定量分析的原理及方法 2、了解高效液相色谱的构造、原理及操作技术 实验原理: 高效液相色谱法：以液体作为流动相的色谱法。它是在经典液相色谱实验基础上，引入气相色谱的理论，在技术上采用高压输液泵，高效固定相和高灵敏的检测器，而发展起来的快速分离分析技术。具有分离效能高，检出限低，操作自动化和应用范围广的特点。 其基本原理：利用欲分配的诸组分在固定相和流动相间的分配有差异（即由不同的分配系数），当两相做相对运动时，这些组分在此两相中分配反复进行，从几千次到百万次，即使组分的分配系数只有微小差异，随着液体流动相却可以有明显的差异，最后使这些组分都得到分离，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪。 仪器和试剂: 1.主要仪器：岛津液相色谱仪(LC-10AT)[配有紫外检测PhenomenexO柱]； μL微量注射器 2、试剂： 甲醇、水 苯和甲苯混合待测溶液 苯标准溶液：2.0μL/mL 甲苯标准溶液：2.0μL/mL 苯、甲苯混合标准溶液：1.0μL/mL、2.0μL/mL、5.0μL/mL、10.0μL/mL 四、[实验步骤1、按操作规程开机。 2、.选择合适的流动相配比，优化色谱条件 通过调节溶剂甲醇和水的混合比例，从而来优化色谱调剂。 调好最佳色谱条件，控制为1ml/min。柱温30，检测波长354nm、苯、甲苯定性分析 在最佳条件下，待基线走稳后，用10μL微量注射器分别进样10μL苯和 甲 苯混合待测溶液，10μL苯标准溶液（2.0μL/mL）和10μL甲苯标准溶液（2.0μL/mL）(微量注射器用甲醇润洗3～5遍)，观察并记录色谱图上显示的保留时间，确定苯和甲苯的峰。 4、苯、甲苯定量分析 在最佳条件下，待基线走稳后，用10μL微量注射器分别进样1.0μL/mL、2.0μL/mL、5.0μL/mL 10.0μL/mL的苯和甲苯混合标准溶液10μL。观察并记录各色谱图上的保留时间和峰面积。绘制苯和甲苯混合标准溶液峰面积与相应浓度的标准曲线 5、苯和甲苯混合待测溶液分析 根据得到的苯和甲苯混合待测溶液的液相色谱图上显示的峰面积值，从绘制的标准曲线上查出苯和甲苯混合待测溶液中苯和甲苯的各自的浓度。处理及分析 分析：本次实验分别选择了甲醇：水=60%：40%，70%：30%，80%：20%的溶剂配比，通过比较不同溶剂配比条件下，甲苯和苯的峰宽、保留时间从而确定采用甲醇：水=80%：20%作为本次实验的最佳色谱条件。 2、定性分析 样品 苯 甲苯 保留时间 3.708 4.804 分析：在同一色谱操作条件和进样量下，分别测定试样溶液中苯和甲苯组分及已知苯和甲苯纯物质的保留时间，并将其色谱峰、保留时间与对应的已知苯和甲苯纯物质进行比较，两者基本相同，从而确定混合样品中含有苯和甲苯。 3、定量分析 苯、甲苯混合标准溶液浓度分别为：1 ul/ml, 2 ul/ml, 5 ul/ml, 10 ul/ml。 苯 甲苯 浓度 峰面积 浓度 峰面积 1 ul/ml 80331 1 ul/ml 237101 2 ul/ml 211055 2 ul/ml 509019 5 ul/ml 806721 5 ul/ml 1378851 10 ul/ml 1692218 10 ul/ml 2815005 Y = aX + b a = 181668.7 b = -119927.9 R^2 = 0.9989202 R = 0.9994599 Y = aX + b a = 287133.8 b = -57107.93 R^2 = 0.9999710 R = 0.9999855 4、未知样品浓度 未知样品 苯 甲苯 样品1 4.9ul/ml 4.5ul/ml 七、结果讨论 1、实验中为什么采用标准曲线法作为定量的方法？ 答：因为实验中待测溶液的组分只有苯和甲苯两种物质，组分比较简单。只要在实验过程中，严格控制且定量进样，就能采用操作、计算简便的标准曲线法得出准确的实验结果。若采用归一化法或内标法，虽然能得到准确更高的实验结果