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就是先做一个菌液浓度与OD值的标准曲线
就是先做一个菌液浓度与OD值的标准曲线,以后测OD值的话,直接根据标准曲线就知道菌液浓度了。波长的确定,可以拿你的菌液扫个谱,找出吸收峰。一般细菌600nm,但也不一定。菌液浓度可以取一定体积的菌液,离心收集菌体,测菌体干重。或者涂板计数,也可以用血球计数板计数(不提倡用)。如果测细菌。简单说来。在细菌培养24小时内。每4小时或者其他时间取样品,用LB平板测定活细菌数量,同时测定培养液的OD 值。等细菌长出后。根基细菌数量和相应OD知理论上就可以做成标准直线了。在以后的试验中,你可以据此,直接得出细菌数,通过OD直线。但不是所以的微生物都有这种对应关系。
原理:比浊法测菌体浓度:在菌体浓度小时,菌体量(g/L)与光密度OD值成正比用得最多的就是505nm测菌丝菌体、560nm测酵母、600nm测细菌。具体的g/L和OD之间好像没有具体的数量对应关系,这个恐怕要凭感觉测OD600。以你所用的培养基为对照,取1毫升菌液稀释一下,取三组连续的剃度测;2,稀释涂平板法,取出1毫升菌液稀释一下,取三到五组连续的剃度,涂到相应的固体培养基上,12小时后数菌落数使用OD600表示,则可以使用比浊法,使用分光光度计,波长600nm,参比可以是水也可以是无菌培养基。2. 使用称量法,10000rpm 离心1min(in EP中 取1ml菌液),弃尽上清,称菌湿重,烘干后则称干重,单位是mg/ml。3. 使用细菌计数板,显微镜镜检菌数,单位是个/ml测OD600?每种菌的OD值不一样吧,可以用紫外分光仪全波段扫描一下你的菌的吸收峰,只用600是不是不太稳妥.2.最快的方法是:先做剃度稀释,再用细菌计数板显微镜,这是最快的方法.3.最传统的方法是剃度稀释涂平板法,这个周期较长24小时.PS:如果你的要测的较多,又没有细菌计数板的话,我教你个节省培养基,较准确的方法:做剃度稀释后,用微量加样器吸取20微升滴在平板上倾斜平板让它自然流成一条线,(也可以直接用加样器拉一直线),每个平板可以做3个样品(注意不要互相污染.也可以分离到单个菌落计数.你可以取一定体积的大肠杆菌培养液经过离心后经过几次洗涤后在离心,然后在将离心后的菌体放入一个称至恒重的称量瓶经过干燥后称至恒重即可大肠杆菌的菌体干重。将一定量的菌液中的菌体通过离心或过滤分离出来,然后烘干(干燥温度可采用105、100或80)、称重。一般干重为湿重的10%—20%,而一个细菌细胞一般重约10-12—10-13g。该法适合菌浓较高的样品。举例:大肠杆菌一个细胞一般重约10–12~10–13g,液体培养物中细胞浓度达到2×109个/ml时,100ml培养物可得10~90mg干重的细胞研究对象的确定
常以微生物的群体为研究单位来研究微生物的生长
微生物的生长通常指细胞数目的增加,或细胞总重量的增加
研究方法 以细菌为例
细菌群体生长情况的测定方法:1测细菌的细胞数目 2测细菌的细胞总重量(干重或湿重)
一、测生长量
1、直接法:测湿重、体积(沉降量)或干重2、间接法(1)比浊法:测菌悬液稀释液的透光值(OD值)。(2)间接成分测定:测含氮量;测C或P量;测遗传物质量:DNA,RNA;(3)生理指标法:呼吸强度、耗氧、酶活性、生物热等。
二、计数法 1、直接计数 (1)计死活总菌数:显微镜下计数
(2)死活菌分别计数:酵母:美蓝染色,活细胞无色,死细胞蓝色; 细菌:丫啶橙染色,活细胞有橙色荧光,死细胞发绿色荧光。
2、间接计数法: 是一种活菌计数法(1)平板菌落计数:好氧菌、厌氧菌均可(实验).菌样稀释→与培养基混匀浇注平板→倒置培养→统计菌落形 成单位cfu→乘以稀释倍数→菌样含菌数
用活菌指示剂TTC(2,3,5-氯化三苯基四氮唑)可使菌落在短时间内形成玫瑰红色?a?a快速鉴定
(2)膜滤器法
二微生物的生长规律
(一)、微生物的个体生长与同步生长
1、个体生长:一个微生物从小到大的生长过程。
2、同步生长:某一群体中所有个体细胞尽可能都处于分裂步调一致的生长状态。
(二)、单细胞微生物的典型生长曲线(见下) 定量描述液体培养基中M群体生长规律的实验曲线称为生长曲线,M典型生长曲线4个阶段:
1、延滞期:指细胞数目没有增加。(1)延滞期的特点: 5点
(2)影响延滞期的因素:种龄、接种量、培养基成分、培养条件等。
2、对数期:细胞数目以几何级数增长的时期。(1)对数期的特点: 3点
(2)描述对数期生长的几个参数
繁殖代数:n = lgx2 ¨C lgx1 / lg2=3.322(lgx2¨Clgx1) 生长速率常数:R = n / t2 ¨C t1
代时:G = 1 / R = t2 ¨C t1 / n
(3)影响指
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