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《发酵工程及设备》 实验指导书 （适用专业：生物工程） 2005年4月 目 录 实验一 土壤中产醋酸菌种的分离筛选……………………………………………………1 实验二 紫外线的诱变育种…………………………………………………………………2 实验三 摇床培养确定酵母菌体培养和营养条件…………………………………………3 实验四 细菌增殖曲线的测定………………………………………………………………4 实验五 木霉T6淀粉酶的固态发酵实验…………………………………………………6 实验六 小型连续发酵实验…………………………………………………………………9 实验七 啤酒麦芽汁制备实验……………………………………………………………11 实验八 啤酒的酿造………………………………………………………………………14 实验九 啤酒风味保鲜期的测定…………………………………………………………15 实验十 反应器的安装与拆卸……………………………………………………………16 实验十一 pH电极的校正…………………………………………………………………17 实验十二 氧电极的校正…………………………………………………………………19 实验十三 体积溶氧传递系数的测定……………………………………………………21 实验十四 反应器培养液的灭菌与接种培养……………………………………………23 实验十五 气升式生化反应器的使用……………………………………………………24 实验十六 中试发酵设备的使用方法……………………………………………………25 实验十七 补料分批发酵动力学研究……………………………………………………27 实验一 　土壤中产醋酸菌种的分离筛选 一．实验目的： 1．根据一定的生产目的如抗生素或酶类的生产，建立不同的筛选模型，并从特定的样品如土壤中筛选出高产适宜的菌株。 2．加深对发酵工程上游技术中菌种选育的认识；学会常规选种和育种的方法，树立科学认真仔细的态度，培养科研协作精神。 二．基本原理： 分离上样中的大部分细菌的分离程序中无需进行富集，但对某些少数细菌则要求特殊的富集或选择技术才能很好地被分离培养。运用细菌的酶诱导性，在分离培养基中添加若干抗生素、复杂底物及生长因子的前体物质来激活细菌某一特殊基因组，可以建立若干富集技术。同样，富集可以促进抗性的产生并维持下来。 三．培养基与仪器 1．培养基： 牛肉膏蛋白胨培养基 2．仪器：全自动高压灭菌锅，培养箱，酸式滴定管 ? 四．实验步骤 1. 确定方案：首先查阅资料，了解所需菌种的生长培养特性。 2. 采样：选取离地面5～15 cm处的土，用小铲子取样，将采集到的土样盛入聚乙烯袋或玻璃瓶中。 3. 增殖：称取0.5g土样（湿重），加到含10ml 25%无菌土样浸出汁的试管中，于26℃、150rpm条件下振荡培养25min，以适宜的样本稀释液系列稀释培养液。然后取0.1 m1涂布于已添加及未添加富集底物的土浸出汁平板。26℃下皿底朝上培养4—10天，将长出的菌落接入斜面，但应挑分离成单个的，以免不纯。 4. 分离：利用产物特性分离得到产目标产物的纯种。 初筛：将细菌接种到含有一定的碳酸钙的牛肉膏蛋白胨固体培养基中进行培养，如果细菌产酸则培养基出现混浊半透明状态，可以根据菌体产生酸溶解出现透明圈大小初步筛选出产酸高的菌种。 复筛：将初筛菌种在斜面培养纯化后，接到牛肉膏蛋白胨液体培养基中37℃深层培养24 h后。取出培养液5m1加入试管内，加0.1moL/LNaOH液中和，然后加氯化铁液2—3滴，摇匀，观察液色是否变为黄红色，如将试管放在火焰上煮沸，有无红褐色沉淀生出，根据所消耗的NaOH量确定产物醋酸的具体生成量。 五．实验结果 菌 株 1 2 3 4 5 6 NaOH的消耗量（ml） 醋酸的生成量（ml） 反应液颜色变化 六．思考题 如果培养中有其它种挥发酸共存，应采用什么方法来测定醋酸的生成量？ 实验二 紫外线的诱变育种 一．目的要求 通过实验，观察紫外线对枯草芽孢杆菌的诱变效应，并学习物理因素诱变育种的方法。 二．基本原理 紫外线对微生物有诱变作用，主要引起是DNA的分子结构发生改变（同链DNA的相邻嘧啶间形成共价结合的胸腺嘧啶二聚体），从而引起菌体遗传性变异。 三．菌种与仪器 菌种：枯草芽孢杆菌； 仪器：血球计数板，显微镜，紫外线灯（15W），电磁搅拌器，离心机 四．操作步骤 （1）菌悬液的制备 （a）取培养48小时的枯草芽孢杆菌的斜面4—5支，用无菌生理盐水将菌苔洗下，并倒入盛有玻璃珠的小三角烧瓶中，振荡30分钟，以打碎菌块。 （b）将上述菌液离心（3