色谱理论与实践.pptVIP

色谱法的理论与实践;一、色谱基础理论概述;色谱法是利用物质在不同的两相中分配、吸附或其他亲和作用的差异，通过多次重复使微小的差别积累起来变成大的差异，从而使混合物中各组分达到分离。 色谱技术在近二十多年中的飞速发展已形成一门专门的科学，称为色谱学。广泛应用于各个领域，成为多组分混合物的最重要的分离分析方法。; 二、色谱法的分类 ;按色谱过程的分离机制分类 ;离子交换色谱（ion exchange ~） 利用在离子交换树脂上的交换能力差别。又可分为: 氨基酸分析（aminoacid analysis） 离子色谱法（ion chromatography） 亲合色谱（affinity ~） 将生物活性配位基（酶、辅酶，抗体等）键合到载体表面形成固定相，利用亲合力大小进行分离(专用于蛋白质等生化样品）。;毛细管电色谱（capillary electro- ~） 依靠色谱与电场两种作用力，利用分配系数和电泳速度差别而分离。 毛细管电泳 （capillary electrophoresis） 以高压电场为驱动力，根据样品组分的淌度和分配系数而分离。 手性色谱（chiral chromatography） 利用手性识别原理，用于手性药物的分离分析。;填充柱 毛细管柱;热力学理论——塔片理论 是由平衡的观点来研究分离过程，是一种半经验理论，以塔片理论为代表。 动力学理论——速率理论 是从动力学观点，即速度来研究各种动力学因素对柱效的影响，以Van Deemeter方程式为代表。;基本概念 色谱峰（peak）——样品产生的电信号强度对洗脱时间作图。称为流出曲线，浓度 -时间曲线，也称色谱带（band）。 色谱峰有三种形式： 对称峰 拖尾峰（tailing peak） 前延峰（leading peak）;峰形参数： 对称因子（symmetry factor，fs） fs =(A+B)/2A； 或用： 拖尾因子（tailing factor，T）来衡量 T=W0.05h/2d1 T=0.95～1.05(正常峰) T＜0.95(前延峰) T﹥1.05(拖尾峰); T=W0.05h/2d1， 或fs=(A+B)/2A;一个色谱峰，可用三项参数来描述： 峰高或峰面积——定量 峰位（保留值）——定性 峰宽—— 衡量柱效;基线（base line ）——在操作条件下，检测器中只有流动相通过时的流出曲线称为基线。它反映了仪器的噪音随时间的变化。 噪音（noise ，N）——各种未知的偶然因素引起的基线起伏的现象称为噪音。噪音的大小用噪音带的宽度来描述。;定性参数 保留值 保留时间，保留体积 相对保留值 保留指数;保留值 保留时间（retention time ，tR）——进样开始到组分色谱峰顶点时间间隔。 死时间（dead time ，t0或tM）——流动相通过色谱系统的时间。;调整保留时间（adjusted retention time，t’R）也称为表观保留时间、校正保留时间——某组分由于溶解或被吸附于固定相，比不溶解或不被吸附的组分在柱中多停留的时间，即： t’R= tR － t0，在实验条件一定（温度、固定相）， t’R决定组分的性质，故t’R是定性的基本参数。;t’R1; 保留体积（retention volume，VR），又称洗脱体积——流动相携带样品进入色谱柱，由进样开始到某组分在柱后出现浓度极大值时，通过色谱柱的流动相体积。 ;相对保留值（?1,2) ——指组分（1）与参照物（2）两者调整保留值的比值。 ?1,2= t’R（1）/ t’R（2） = K1/K2 (K为分配系数）;柱效率的参数（色谱峰的区域宽度） 标准差（?，standard deviation) 半峰宽（peak width at half-height，W1/2或Y1/2） 基线宽度（peak width，W或Y）;标准差——在正态分布曲线中，将x=±1处（拐点）的峰宽之半称为标准偏差。在实际工作中,标准差为峰高0.607h 处的峰宽之半。 峰形窄， ?小，分散度小，柱效高。反之，柱效低。;半峰宽——也称半腰宽，为色谱峰高之半处的峰宽。W1/2=2.355 ?， W1/2易确定，且比?值大，故测量误差较?小。;峰宽——也称基线宽度。对色谱峰两侧的拐点作切线,在极限上所截的距离,称为峰宽。 对色谱峰两侧作切线后为等腰三角形，底边为峰宽，而?为等腰三角形高度之半处的宽度之半，所以 ：W=4?;? ? ;分配系数（partition coefficient，K ）