微生物限度检查SOP.docVIP

题 目 微生物限度检查SOP 标准编号 QC/P1-011/01 共11页 第1页 制定部门 质检中心 复 制 号 起 草 人 日 期 2010年09月10日 审 核 人 日 期 2010年09月11日 批 准 人 日 期 2010年09月19日 颁发部门 质量管理部 发布日期 2010年09月19日 实施日期 2010年10月01日 变更记录 修订号 发布日期 实施日期 变更原因及目的 00 2006年04月19日 2006年05月08日 首次发布 01 2010年09月19日 2010年10月01日 根据2010版药典修订 分发单位 生 产 部〔 〕 质量管理部〔 〕 质检中心〔 〕 动力设备部〔 〕 固体制剂车间 〔 〕 注射剂车间〔 〕 物 供 部〔 〕 人力资源部〔 〕 行政办公室〔 〕 销 售 部〔 〕 计 财 部〔 〕 1 适用范围: 本规程规定了微生物限度检查方法及操作要求，适用于本公司检品的微生物限度检查。 2 责任人:  质检中心生测组检验员。 3 仪器、设备: 超净工作台 恒温培养箱 生化培养箱 显微镜 高压蒸气消毒器 酒精灯 无菌衣、裤、帽、口罩 消毒鞋 刻度吸管(1ml、10ml) 具塞试管(20ml) 三角瓶(100ml) 平皿(φ90mm) 乳钵 镊子 接种环 棉花 洗耳球 除菌滤器 抽滤瓶(1000ml) 微孔滤膜(≤0.45μm) 恒温干燥箱 4 试验前的准备工作 4.1 用具的包扎: 4.1.1 刻度吸管：在刻度吸管上端管内，松松地塞进少许棉花，然后分别用纸严密卷好，再取一层消毒布与牛皮纸包好。 4.1.2 用布袋将洗净晾干的无菌衣、裤、帽、口罩、配套装入，扎紧口袋，再用牛皮纸包扎好。 4.1.3 每批样准备20个清洁的φ90mm平皿，用消毒布和牛皮纸包扎好。 4.1.4 滤器: 将微孔滤膜先在水中浸泡湿润,取出后固定在细菌滤器的滤板上。滤板上、滤膜下均用耐高温垫圈垫好,上好滤器。滤器的螺旋灭菌前勿拧太紧，滤器上口用8层纱布及牛皮纸包扎，装妥后放入瓷盒内，再将盛滤器的瓷盒盖好盖子，用牛皮纸包扎。 4.2 用具的灭菌: 无特殊要求,请参照《卧式圆形压力蒸气消毒器SOP》操作。 4.3 洁净室的消毒及检测: 无特殊要求,请参照《洁净室清洁SOP》、《沉降菌取样SOP 》操作。 4.4 培养基的配制: 请参照商品干燥培养基使用说明书规定方法配制，测试其pH值,应符合规定,否则应校正。 5 细菌、霉菌及酵母菌计数 5.1 计数培养基的适用性检查 5.1.1 菌种: ⑴ 大肠埃希菌[CMCC(B)44102] ⑵ 金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003] ⑶ 枯草芽胞杆菌[CMCC（B）63504] ⑷ 白色念珠菌〔CMCC（F）98001〕 ⑸ 黑曲霉〔CMCC（F）98003〕 5.1.2 菌液的制备： 5.1.2.1 接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、桔草芽胞杆菌的新鲜培养物至营养肉汤中；接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30-35℃培养18-24小时。 5.1.2.2 接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁基培养基中，23-28℃培养24-48小时。 5.1.2.3 分别取上述菌悬液，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至与5.1.4项下的菌液浊度标准管相同的浓度，然后作10倍系列稀释，制成50- 100cfu/ml的菌悬液。 5.1.2.3 接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面基培养基上，23-28℃培养5-7天，加入3-5ml0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu（菌落形成单位）的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，23～28℃培养5～7天，加入3～5ml含0.05%（ml/ml））根据硫酸和氯化钡的比例来 管 号 0.5 1 2 3 4 5 0.25%BaCl2（ml） 0.2 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0 1%H2SO4(ml) 9.8 9.6 9.2 8.8 8.4 8.0 细菌的近似浓度(×108/ml) 1 3 6 9 12 15 cfu试验菌，分别注入平皿中，立即倾注琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，按平皿法测定其菌数。薄膜过滤法计算时，取规定量试验可能用的最低稀释级供试液，过滤，冲洗，在最后一次的冲洗液中加入50～100cfu试验菌，过滤，按薄膜过滤法测定其菌数。 5.2.1.2 菌液组 测定所加