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转基因技术在大豆育种上的应用 摘 要：常规育种技术存在育种年限长、难以打破性状连锁、多基因重组几率低、远缘杂交困难等问题，难以满足日益增长的对大豆品质和产量的需求。目前，大豆遗传转化的主要方法有:农杆菌介导法、基因枪法、花粉管通道法等。本文主要对大豆遗传转化的受体系统、常用转化方法的主要影响因素以及未来大豆遗传转化的发展趋势等方面进行了综述。 关键词：转基因，大豆育种，遗传转化，受体系统 前 言：大豆属于豆科、蝶形花亚科、大豆属的二倍体(2n = 40) 植物起源于中国后传入日本、欧洲、美国等地。大豆是一种非常重要的农作物市场需求量大但是在生产过程中经常受病、虫害以及干旱等不利条件的影响产量极不稳定。因此培育抗病虫、高产、优质大豆新品种对促进农业生产、提高人类生活水平等有着重要意义。常规育种技术由于存在育种年限长、难以打破性状连锁、多基因重组几率低、远缘杂交困难等问题难以满足日益增长的对大豆品质和产量的需求。现代生物工程技术可以打破生物之间的界限实现遗传物质的重新组合为大豆的育种工作开辟了一条全新的途径。 相对于水稻、烟草等作物而言大豆的有效再生体系以及高效遗传转化系统的建立一直是植物基因工程领域的重点和难点近年来随着现代生物技术的飞速发展大豆遗传转化的研究取得了较大的突破。大豆遗传转化的主要方法有:农杆菌介导法、基因枪法、花粉管通道法、子房注射法、电击法、农杆菌介导和基因枪结合转化法、超声波辅助农杆菌介导法等应用最为广泛的是农杆菌转化法其中根癌农杆菌介导大豆子叶节的遗传转化系统最为有效。笔者对大豆遗传转化的受体系统、常用转化方法的主要影响因素以及未来大豆遗传转化的发展趋势等方面进行了综述。 正 文 1 　大豆遗传转化受体系统的研究 大豆高效再生系统是其进行遗传转化的必要前提。大豆组织培养常用的外植体有子叶节、成熟或未成熟胚、胚轴、胚尖、半种子等诱导途径主要有器官发生途径和体细胞胚胎发生途径两种。 1. 1 　大豆器官发生途径 1973 年Kimball等以大豆下胚轴为外植体在B5和MILLER 培养基上诱导产生不定芽但未能获得再生植株。Cheng等最早通过器官发生途径获得了大豆再生植株随后不同研究者分别采用不同外植体—未成熟胚、成熟胚、真叶、下胚轴、子叶节经过器官发生途径获得了再生植株。近年来国内外报道的大豆再生体系多以子叶节为外植体通过施加外源细胞分裂素(主要是6-BA) 来诱导子叶节处潜在的分生组织增殖产生不定芽再经诱导获得再生植株。刘海坤等利用胚尖为外植体建立了一种高效的再生体系其植株再生率达87.7%。 1. 2 　大豆体细胞胚胎发生途径 由于体细胞胚发生途径可以大量获得转基因植株以及大规模提供优良种质是目前大豆遗传转化较为理想的受体系统。大豆体细胞胚胎发生途径常用外植体主要有未成熟子叶、未成熟胚和未成熟下胚轴等。1983Christianson等首次以未成熟胚的胚轴为材料用改良的MS 培养基附加2, 4-D 诱导出体细胞胚胎 并获再生植株。随后Lazzeri等、Ranch等、Barwale等、Finer 等分别用大豆未成熟胚和未成熟子叶诱导胚状体获得了再生植株。其中 Finer 等 报道的体细胞胚胎悬浮培养被认为是较好的再生体系。该系统的优点是：(一) 胚性细胞团中可增殖的胚性细胞处于表面或近表面且能在许多位点上形成体细胞胚这些胚性细胞接受外源基因能力较强有利于转化；(二) 在胚性细胞团增殖培养过程中由于培养液与胚性细胞团充分接触这样在筛选时能更好的解决嵌合体问题。大豆未成熟胚被认为是体细胞胚胎发生途径理想的外植体。 1. 3 　其他组织培养再生途径 植物原生质体培养也是一种重要的再生体系与利用大豆外植体培养再生植株相比其优越性在于容易摄取外源遗传物质但是获得植株困难培养过程繁杂工作量大再生周期长不同基因型差异很大再生效率低以及相关的遗传转化方法(电击法、脂质体法、PEG法) 的转化效果也不理想所以在一定程度上限制了该研究在遗传转化上的应用。植物花药培养研究起始于20 世纪50 年代初期大豆花药培养目前面临的主要是如何突破由愈伤组织诱导出苗以及如何解决诱导频率低等问题如果这些问题得到解决将会加速大豆新品种的选育。 2006 年Franklin G等报道了一种新的大豆再生体系—“Florigenesis”，在MS 培养基中附加TDZ和NAA 直接诱导成熟子叶外植体开花产生种荚、获得种子。该方法不经过体细胞胚或器官等植株再生途径在较短的时间内获得种子突变体少但是存在后代不育的问题。 2 　大豆遗传转化方法 植物转基因方法主要有基因枪法、农杆菌介导法、花粉管通道法、PEG法、电激法、超声波法、碳化硅纤维法等。大豆遗传转化中主要应用的是农杆菌介导法、基因枪法和花粉管通道法。 2. 1 　农杆菌介导法 根癌农杆菌介导的遗传转