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H2O2对家蝇蛹内部几种酶活性影响摘要：目的研究外源H2O2对家蝇蛹内与抗性相关的几种酶活性的影响。方法通过H2O2诱导，测定家蝇蛹内过氧化氢酶（CAT）、过氧化物酶（POD）、抗坏血酸过氧化物酶（AsA-POD）以及多酚氧化酶（PPO）的活性变化。结果H2O2处理后蛹内CAT和AsA-POD的活性变化规律与处理前差别不大；POD活性在H2O2处理后12 h内出现活性高峰，约为对照组的2.5倍，此后稍高于对照组，最后基本与对照组持平；PPO活性在处理后12 h内与对照组相当，此后活性骤然升高，处理后24 h达到对照组的2.13倍，然后变化速度减慢，但一直维持在对照组的1.3倍左右，48 h后活性开始下降。结论H2O2对CAT和AsA-POD的活性影响较小，对POD和PPO的活性有一定的影响。 关键词：家蝇；蛹；过氧化氢；过氧化氢酶；过氧化物酶；抗坏血酸过氧化物酶；多酚氧化酶 中图分类号：Q814文献标识码：A文章编号：1672-979X(2007)08-0008-03 活性氧是机体正常代谢过程中产生的一类氧化性物质，具有很强的氧化能力，对许多生物功能分子有破坏作用。正常情况下，因细胞内存在着自由基清除系统，细胞内的自由基水平比较低，不会造成伤害。这个清除系统主要为酶催化系统，如SOD催化O2H2O2，H2O2再由过氧化氢酶（CAT）、过氧化物酶（POD）分解，从而维持正常的生理活动。但外界刺激物会促使昆虫体内超氧阴离子自由基（O2O2）、过氧化氢（H2O2）和羟自由基（OH）等活性氧增加，同时也能诱导昆虫产生其它生理活性物质，如昆虫抗菌肽、抗菌蛋白、防御素及其它小分子物质用于防御。这是昆虫在进化过程中逐步形成的抵抗外源刺激物和不良因素影响的有效途径。 完全变态的昆虫如蝇、蚕中，从幼虫过渡到成虫时的虫体形态叫蛹。蛹广泛存在于自然界，但是，目前对昆虫蛹的研究大多限于从中提取油脂[1-3]和蛋白质[4-6]等生物活性物质，在生理生化方面的研究较少。家蝇（Musca domestica）世界性分布范围较广，饲养方便，作为实验性昆虫具有较大的优势。本实验从酶学角度研究了外源H2O2对家蝇蛹内与抗性相关的几种酶活性的影响，为全面了解家蝇整个生活史的抗氧化系统以及其它生理生化反应提供重要依据，为研究家蝇蛹的食用药用价值打下理论基础。 1材料与方法 1.1实验材料及处理 家蝇由南开大学生命科学学院遗传工程实验室饲养；温度28 ℃；相对湿度75%；光/暗12 h/12 h；饲料：麦麸∶蛋白粉∶水=10∶1∶20。 材料处理：取刚蛹化的家蝇蛹，部分作为对照，另一部分用30% H2O2浸泡45 min后，迅速用无菌蒸馏水将蛹表面残留的H2O2冲洗干净，晾干，以进行下一步实验。 1.2酶的提取及其活性测定 1.2.1酶的提取取1 g蛹，加入4 mL酶提取缓冲液，迅速在冰浴条件下研磨成匀浆，在4 ℃下13 000 r/min 离心20 min，上清液即为酶粗提液。 1.2.2酶活性的测定 1.2.2.1过氧化氢酶（CAT）[7]以改进的Aebi（1984）法测定CAT活性：反应混合液3 mL为0.025 mol/L磷酸缓冲液（pH 7.0），10μLH2O2和10μL酶液，于240 nm处测定吸光度值变化。在测定条件下30 s内吸光度值改变0.01单位为1个酶活性单位。 1.2.2.2过氧化物酶(POD)[8]用愈创木酚法(Charles，1998)测定POD酶活性：在50 mL 0.05 mol/L（pH 7.2）磷酸缓冲液中加入28μL愈创木酚，溶解后加入19μL H2O2作为POD反应液，取150μL粗酶液，2.5 mL POD反应液混匀后，立即于470nm处测定吸光度。在测定条件下，1 min内吸光度值改变0.01单位为1个酶活性单位。 1.2.2.3抗坏血酸过氧化物酶（AsA-POD）[9]用修改的Nakano Asada（1981）方法：3 mL反应液为0.025 mol/L pH 7.0的磷酸缓冲液（含有0.1 mmol/L EDTA，1.0 mmol/L H2O2，0.25 mmol/L AsA）和适量酶液，测定290 nm下吸光度的变化。在测定条件下，1 min内吸光度值改变0.01单位为1个酶活性单位。 1.2.2.4多酚氧化酶（PPO）[10]用改进的李宁等（2002）的方法：在2.5 mL 0.05 mol/L的磷酸柠檬酸缓冲液（pH 5.0）中加入1 mL 0.04 mol/L的邻苯二酚溶液，再加入50μL酶液，混匀后测定398 nm下吸光度值的变化。在测定条件下，2 min内吸光度值改变0.01单位为1个酶活性单位。 1.3实验