HPLC法测定不同产地玄参肉桂酸含量.docVIP

HPLC法测定不同产地玄参肉桂酸含量摘要：目的：对采收到的白川县、广东、浙江和宝县县4个不同产地的玄参的有效成分肉桂酸进行含量测定。观察这4个不同产地的玄参的肉桂酸含量是否有明显区别。方法：采用HPLC分析法。色谱条件：色谱柱：kromasilODS―1(250ram x4．6mm)。流动相：乙腈：水(20：80)。检测波长：272mm，柱温：30℃。结果：35份玄参样品得到的指纹图谱无明显区别，肉桂酸含量差异不显著。结论：这4种不同产地的玄参的生长环境、地理位置等自然因素对肉桂酸含量的影响不大。 关键词：玄参；肉桂酸；HPLC 中图分类号：11284.2 文献标识码：A　文章编号：1673－7717(2008)01－0117－02 玄参为玄参科(Scrophulariaceae)植物玄参Scrophularianingpoensis Hemsl.的干燥根。主产于浙江、湖北、江苏、江西等省。为常用中药，具有凉血滋阴、泻火解毒之功效，用于热病伤阴、津伤便秘、痛肿疮毒、骨蒸劳嗽、舌绛烦渴、温毒发斑、目赤、咽痛、瘰疬、百喉等症。本文以具有轻泻作用的肉桂酸(cinnamie acid)为指标成分，研究建立高效液相含量测定方法，通过对4种不同产地的玄参完整药材进行测定，讨论这4种产地不同的玄参的肉桂酸含量是否有显著不同。 1　仪器和试药 仪器：Waters 600E型高效液相色谱仪，Empower色谱工作站，UV－1600(北京瑞利公司)。 试剂：乙腈为色谱纯(山东禹王实业有限公司)，经0.45em尼龙膜过滤、超声。水为超纯水，经0.45em水系膜过滤、超声。 对照品：肉桂酸购自中国药品生物制品检定所。 药材：4种不同产地的玄参完整药材分别采自白川县、宝庆县、广东及浙江。每种玄参药材各取10份。由湖南中医药大学中药鉴定教研室刘塔斯教授鉴定。 2　方法和结果 2.1　方法 2.1.1　实验步骤药材处理：取白川县、宝庆县、广东、浙江4种不同产地的玄参完整药材各lO份，置于干燥箱中105℃干燥。打成粉末。 对照品溶液的制备：精密称取肉桂酸的对照品1.0mg置于5mL容量瓶中，以甲醇－水(30：70)调制成0.2mg／mL的标准溶液，然后再分别稀释成0.02、O.01、0.002、0.001、0.0015、0.0005mg/mL的标准液。 供试品溶液的制备：精密称取35份玄参药材粉末各0.5g，于具塞三角瓶中精密加入甲醇－水(30：70)50mL，称重，浸泡1h后超声提取30min，放冷，补足失重，摇匀、过滤，取续滤液作为供试品溶液。 2.1.2　最大吸收波长的测定取肉桂酸的对照品(已配备好)，经紫外可见分光光度计进行波长扫描，测定其最大吸收波长为272nm(图1)。 2.1.3　色谱条件　色谱柱：kromasil ODS―T(250mm×4.6mm)。流动相：乙腈－水(20：80)。流速：1.0mL／min。检测波长：272nm。 2.1.4　线性关系的考察取不同浓度的标准液分别进样10ul，测定蜂面积的积分值，以标准液中肉桂酸的含量(懈)为横坐标，以峰面积为纵坐标进行回归，得到肉桂酸的回归方程为：y 309.6x+0.1355，r=0.9999。肉桂酸在峰面积处于1.08468－62.0274.范围内呈良好的线性关系(图2)。 2.1.5　流动相条件的选择分别取乙腈和超纯水比例为50：50,40：60、30：70、20：80的流动相，取一份供试品溶液进样10uL，观察在不同比例流动相的洗脱下玄参药材的色谱峰的峰形，峰位及分离度大小。结果发现以乙腈、超纯水(20：80)为流动相时，色谱峰的保留时间、分离度最适宜，均优于前几种比例。故流动相的条件应选择乙腈－水(20：80)(参见图3)。 2.1.6　特征峰的确定肉桂酸对照品的色谱图中，其保留时间为3.133min，再观察供试品的色谱峰(见图4－7)发现在3.100min左右均出现一个峰形相近的峰，则可据此确定这个峰即为供试品中肉桂酸的色谱峰。 2.2　结果 见表1。 3　讨论 从文中所给出的这4种不同产地的玄参色谱图中可以看出，保留时间在1.500、1.850、3.600rain左右均有色谱峰，这说明还有其它3种成分。 分析这4种不同产地的玄参色谱图，发现主要色谱峰的整体图谱基本一致，且肉桂酸的含量无显著性差异。这说明这4种不同产地的玄参的生长环境、气候、地理位置等自然因素对有效成分肉桂酸的含量影响不明显。 1