HPLC法测定余甘子中没食子酸含量.docVIP

HPLC法测定余甘子中没食子酸含量摘要：目的用高效液相色谱法测定余甘子中没食子酸含量。方法以C18色谱柱为分析柱，甲醇?0.2％磷酸溶液(5?95)为流动相，检测波长273nm。结果没食子酸的进样量在0.0280～2.795μg范围内与峰面积有良好的线性关系，回收率99.9％，RSD=1.19％(n=6)。结论此方法简便、快速、准确，可用于余甘子的质量控制。 关键词：高压液相色谱法；余甘子；没食子酸；含量 中图分类号：R282.71文献标识码：A文章编号： 1672?979X(2009)07?0049?03 余甘子为大戟科植物余甘子(PhyllanthusemblicaL.)的干燥成熟果实，冬季至次春果实成熟时采收，除去杂质，干燥后即得[1]。本品系藏族习用药材，具有清热凉血、消食健胃、生津止咳作用，临床上用于治疗血热血瘀、消化不良、腹胀、咳嗽、喉痛、口干等疾病[2]。余甘子含鞣质、葡萄糖没食子鞣苷、没食子酸[3]。现行标准仅有鉴别无含量测定，不能有效的控制产品的质量。没食子酸为余甘子的主要活性成分，我们选择测定没食子酸含量作为本品质控定量指标，采用HPLC法可准确、简便、有效地控制余甘子的质量。 1仪器与试药 Agilent1200?DAD系列HPLC。 没食子酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号110831?200302，测定含量用)；甲醇为色谱纯，重蒸馏水，其余试剂为分析纯。 收集了10批次全国各地的余甘子药材样品，经四川省食品药品检验所中药室周娟主任鉴定为戟科植物余甘子PhyllanthusemblicaL.的干燥成熟果实。所有样品粉碎后过三号筛。样品收集情况见表1。 2方法与结果 2.1色谱条件 色谱柱：月旭AQC18(200mm×4.6mm，5μm)，流动相：甲醇?0.2％磷酸溶液(5?95)，流速1.0mL/min，柱温25℃，检测波长273nm，进样量10μL。理论板数按没食子酸峰计算不低于2000。在此色谱条件下，供试品色谱中没食子酸色谱峰保留时间与相应对照品一致，见图1。 2.2对照品溶液的制备 精密称取五氧化二磷减压干燥12h以上的没食子酸对照品适量，加50％甲醇制成每1mL含25μg的溶液，即得。 2.3供试品溶液的制备 取1号样品粉末约0.1g，精密称定，置入具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇50mL，称定重量，加热回流60min，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，上清用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得。 2.4方法学验证 2.4.1考察线性范围精密称取没食子酸对照品27.95mg，置入50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度摇匀，作为贮备液；精密量取贮备液1mL，置入10mL量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度摇匀，作为对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液0.5，5，10，15，20，25μL及贮备液5μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，测定峰面积。以峰面积(A)为纵座标，没食子酸量(μg)为横座标进行线性回归，回归方程为Y=3846.5X?0.483，r=1.0000。结果表明，没食子酸进样量在0.0280～2.795μg之间时，与峰面积线性关系良好。 2.4.2进样精密度试验精密量取没食子酸对照品溶液5μL，注入液相色谱仪，共5次，记录峰面积，测得的平均峰面积为1079.2，RSD0.68％。进样精密度良好。 2.4.3重复性试验精密称取1号样品6份，每份1g，照上述方法实验，记录色谱图并计算含量。结果平均含量22.18mg/g，RSD1.19％，重现性良好。 2.4.4加样回收试验精密吸取浓度为0.559mg/mL对照品溶液6份，每份2.0mL，分别置入150mL具塞锥形瓶中，水浴挥干甲醇。取已知含量的1号样品(含量22.18mg/g)粉末约0.05g，共6份，精密称定，置入上述锥形瓶中，精密加入50％甲醇50mL，按拟定方法制备和测定供试品溶液，记录色谱图，计算回收率，平均回收率99.9％，RSD1.19％。准确度良好。 2.4.5耐用性试验 2.4.5.1稳定性试验取对照品溶液和供试品溶液，按上述色谱条件测定，在不同时间注入液相色谱仪，考察峰面积的变化，结果见表2。由表2可见，对照品溶液和供试品溶液在24h内稳定。 2.4.5.2不同色谱柱考察精密称取本品粉末(1号样品)0.1g，按上述方法实验，采用不同色谱柱测定本品并计算含量。结果见表3。RSD2.23％，表明本方法耐用性良好。 2.5样品测定 分别精密吸取对照品溶液与各批次样品的供试品溶液(制备方法同2.3)各10μL，注入液相色谱仪，依法测定，计算含量，结果见表