HPLC法测定白癜风胶囊中补骨脂素含量.docVIP

HPLC法测定白癜风胶囊中补骨脂素含量摘 要 目的：测定补骨脂素在白癜风胶囊中的含量，寻找控制产品质量方法。方法：采用高效液相色谱法测定：ODS-C?18柱(5μm，46mm×250mm)。乙腈-0．125%磷酸(30：70)为流动相，流速为lml/分；柱温40℃，检测波长247nim。结果：补骨脂素在0．0780～0．4680 μg间线性关系良好，γ=0．9999；回收率为97.5%，RSD=2．02%。结论：本方法准确可靠、重现性好，可用于该制剂的质量控制。 关键词 白癜风胶囊 高效液相色谱法 补骨脂素 白癜风胶囊是由补骨脂、黄芪、红花等15味中药组成，具有益气行滞，活血解毒，利湿消斑，驱风止痒的功效。补骨脂为方中君药，成分清楚，故决定测补骨脂中补骨素的含量。 仪器与试药 (Lc-2010A高效液相色谱仪(日本岛津)，SPID．10AVP检测器，C?18ODS柱(迪马公司，4．6mm×250mm,5μ)。补骨脂素对照品由中国药品生物制品检定所提供，批号为739-9205，规格：供含量测定用。 方法与结果 色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0．125%磷酸溶液(30∶70)为流动相，检测波长为247nm。理论板数按补骨脂素峰计算应不低于3300。 对照品补骨脂纯度的测定：采用归一化法测定补骨脂素的纯度为99．03%，符合含量测定要求。 对照品溶液的制备:称取补骨脂素对照品约10mg，精密称定，置25ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取1ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。 供试品溶液的制备：取本品装量差异项下的内容物，研细、混匀，取约0．75g，精密称定，精密加甲醇25ml，称定重量，超声处理(100W，40KHz)30分钟，冷却，再称定重量，加甲醇补足减失的重量，滤过，弃去初滤液，取续滤液，即得。 空白溶液的制备：按供试品溶液制备时取样量，折算成处方中除补骨脂外其他药材的取样量，按制法制成样品，再按供试品溶液的制备方法制成空白溶液。 空白试验：空白溶液、供试品溶液及对照品溶液按上述条件测定，试验结果，供试品滤液与对照品溶液在相应的保留时间处有吸收峰，而空白溶液无吸收，说明空白溶液无干扰。 标准曲线的制备:分别精密吸取对照品溶液5、10、15、20、30μ l注入液相色谱仪，测定。回归方程： γ=7769643．624×16597．6486 γ=0．9999 线性范围0．078 ～0．468μg 稳定性试验：依上述色谱条件，分别在0、2、4、6、8小时测供试品溶液吸收峰峰面积，结果表明，供试品溶液在8小时内是稳定的，RSD为1．30%。 精密度试验：将供试品溶液重复测定5次，RSD为0.88%。 重复性试验：取同一批号的样品，平行制备5份供试品溶液，分别进行含量测定，RSD为1．23%回收率试验；取己知含量的同一批号样品5份，精密称定，精密加入对照品溶液,按上述方法制备试品容液。测定：计算回收率。结果见表1。 平均回收率97．54%。说明此方法可行。 样品含量测定：按上述方法制备5批供试品溶液，取供试品溶液和对照品溶液，分别进样，测定样品中补骨脂素的含量分别为0．17、0．20、0．22、0．19、0．23mg／粒。 讨 论 对提取溶剂的选择:根据文献报道［1，2］，我们试验了氯仿、醋酸乙酯、甲醇、乙醇，结果显示补骨脂素提取含量甲醇提取率高，又进一步比较不同浓度甲醇提取所含补骨脂素提取率，50%甲醇水溶液提取的补骨脂素的含量明显高于其他浓度的甲醇水溶液，提取效率最高，但杂质很多，不易分离，故选择甲醇为提取溶剂。 对提取方法和时间的选择：我们试验了超声提取、水浴回流提取，结果表明超声提取即可提取完全，省时方便。 色谱条件的选择［3］；实验过程中考察了甲醇-水不同比例及乙腈-水、乙腈-0．125%磷酸溶液不同比例的流动相和不同类型色谱柱分离效果，最终确定了本方法所采用的色谱条件，分离度较好，结果稳定。 参考文献 1 中华人民共和国药典(一部)．北京：化学工业出版社，2005 2 许勇，李乐道，熊志力，等．高效液相色谱法测定中药材补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素含量．色谱，2003，2l(7)：385-387 3 陈发奎．常用中草药有效成分含量测定.北京：人民卫生出版社，1997 1