HPLC法测定蛋黄馏油中哈尔满含量.docVIP

HPLC法测定蛋黄馏油中哈尔满含量摘要：目的：建立高效液相色谱法测定蛋黄馏油中哈尔满定量分析方法。方法：色谱条件：Shim－packODS C18柱(6.0mm×150mm，5tun)，流动相：甲醇―0.025mol／L磷酸三乙胺(20 80)，检测波长280nm，流速1mL／min，柱温40℃。结果：在上述色谱条件下，哈尔满对照品进样量在O.0678一O.339μg范围内与其峰面积呈良好的线性关系。r=0.9991。对照品和样品的精密度试验的RSD分别为0.39％和1.95％(n=5)。样品的稳定性试验的RSD为2.4％(n=5)。重复性试验RSD为1.10％(n=5)。平均回收率为96.11％，RSD为1.71％(n=5)。结论：供试液中哈尔满与相临组分分离度良好，且保留时间适宜，方法简便准确，重复性好，可用于测定蛋黄馏油中哈尔满的含量。 关键词：蛋黄馏油；生物碱；哈尔满；高效液相色谱法；含量测定 中图分类号：11284.2　文献标识码：A　文章编号：1673-7717(2007)11-2375-02 蛋黄馏油为雉科动物家鸡的卵煮熟后剥取卵黄，经加热熬炼而得的棕褐色或黑褐色的油状液体。蛋黄馏油作为药用已有1400余年的历史，现代临床应用非常广泛，是一类极具市场价值的中药。近代关于蛋黄馏油中的主要成分国内国外进行了很多研究，其中什邦郎、小营卓夫等在探索鸡蛋“烧炭存性”物的强心成分时，发现其所含的生物碱成分哈尔满有抗菌活性，这与蛋黄馏油临床主要用于治疗真菌所致的癣类皮肤病、湿疹、烧伤、静脉曲张性溃疡等症相符。但目前对哈尔满的含量测定尚未见报道，本文采用高效液相色谱法测定了蛋黄馏油中哈尔满的含量，方法简便、灵敏、准确，为提高蛋黄馏油的质量标准提供了依据。 1　仪器与试药 1.1　仪器 岛津LC一10AT高效液相色谱仪，日本岛津Shim―pack ODS C18柱(6.0ram×150mm，51μm)，UV检测器。岛津UV-265FM紫外分光光度计。 1.2　原料 雉科动物家鸡(Gallus galllls domesficus Bfis-son)的卵煮熟后剥取的卵黄。 1.3　试剂 乙醚、盐酸为分析纯，磷酸、三乙胺、甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，哈尔满对照品(纯度：98％)。 2　色谱条件的选择 色谱柱：Shim-pack ODS Cis柱(6.0mm×150mm，5μm)，流动相：甲醇―0.025mol／L磷酸三乙胺(20:80)，检测波长280nm，流速1mL／min，柱温40℃，理论塔板数按哈尔满峰计算应不低于2000。 3　试验方法与结果 3.1 检测波长的选择 取哈尔满对照品适量，加甲醇稀释后作为对照品溶液，以甲醇为参比，用紫外分光光度计在200～400nm波长范围内扫描，测定哈尔满在280nm和335nm处有较大的吸收，经试验比较最后确定选择280nm为检测波长。紫外图谱见图1。 3.2　流动相的选择 采用不同体系的流动相进行比较试验，结果发现以甲醇0.025mol／L磷酸三乙胺(20:80)为流动相条件下，供试液中哈尔满与相临组分分离度良好，且保留时间适宜，方法重复性良好。故选择甲醇―0.025mol／L磷酸三乙胺(20:80)作为流动相。 3.3　对照品溶液的制备 精密称取干燥至恒重的哈尔满对照品0.00339g，置100mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。即得0.0339mg／mL的对照品溶液。 3.4　供试品溶液的制备 取蛋黄馏油10g加入100mL乙醚，每次取5％的盐酸100mL萃取3次，合并酸水层后蒸干，溶于少量甲醇后移至100mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，微孔滤膜滤过，即得。 3.5　系统适应性试验考察 在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μL注入高效液相色谱仪，测定。结果表明，保留时间适中，供试品色谱峰的保留时间和峰形与对照品的均一致，供试品哈尔满色谱峰与其它相邻色谱峰的分离度为2.3，对照品的理论塔板数为2539，供试品的理论塔板数为3458。说明该分析条件良好。符合定量分析要求。对照品和供试品高效液相色谱见图2～3。 3.6　线性关系考察 精密吸取浓度为0.0339mg／mL的哈尔满对照品溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0μL，按上述色谱条件测定峰面积，以哈尔满对照品峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程如下：Y=35678.9321x+59578.1069，相关系数r=0.9991。结果表明，哈尔满的进样量在0.0678-0.339μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。结果见表1，标准曲线