HPLC测定盐酸左氧氟沙星滴眼液中防腐剂羟苯乙酯含量.docVIP

HPLC测定盐酸左氧氟沙星滴眼液中防腐剂羟苯乙酯含量摘要：目的建立HPLC测定盐酸左氧氟沙星滴眼液中防腐剂羟苯乙酯含量的方法。方法以十八烷硅烷基键合硅胶为填充剂；以0.005 mol／L醋酸铵溶液(每1 000 mL含三乙胺10 mL，用冰醋酸调pH 5.0)一乙腈(50：50)为流动相；检测波长25611m：流速1.OmL／mim柱温35℃。结果羟苯乙酯在0.017 7～0.041 3mg／mL范围内呈良好的线性关系(r=0.999 97)。平均回收率100.4％(n=9)，RSD=0.97％。结论此法简便、快速、准确，可有效控制产品质量。 关键词：盐酸左氧氟沙星滴眼液，羟苯乙酯；HPLC：含量测定 中图分类号：R988.1 文献标识码：A 文章编号：1672-979X(2010)09-0326-03 滴眼剂中，羟苯乙酯是作为对羟基苯甲酸酯类防腐剂收载的，它对霉菌及酵母菌的抑制效力较强，对革兰阳性菌的作用比革兰阴性菌强。以前测定羟苯乙酯等防腐剂含量的方法较少，我们根据2010版药典建立了测定盐酸左氧氟沙星滴眼液中羟苯乙酯含量的方法。 1仪器与试药 Waters 600E高效液相色谱仪，2996 PDA检测器，717 pLus进样器；羟苯乙酯对照品(中国药品生物制品检定所)；盐酸左氧氟沙星滴眼液(山东博士伦福瑞达制药有限公司实验室提供)；乙腈为色谱纯；超纯水、醋酸铵、冰醋酸均为分析纯。 2色谱条件 色谱柱：以十八烷基键合硅胶为填充剂(4.6 mmX 150 mln，5um)；流动相：0.005 MoL／L醋酸铵溶液(每1 000 mL含三乙胺10 mL，冰醋酸调pH50k乙腈(50：50)；检测波长256ran；流速1.0ml／nin；柱温35℃。 3方法与结果 3.1适应性试验 称取羟苯甲酯、羟苯乙酯和羟苯丙酯适量，加水适量，98～100℃水浴加热溶解，冷却至室温，用水稀释制成每1 mL中分别约含30ug的混合溶液，取10uL注入液相色谱仪，记录色谱图，色谱峰流出顺序依次为羟苯甲酯、羟苯乙酯和羟苯丙酯。测得羟苯甲酯与羟苯乙酯的分离度R1=6.4，羟苯乙酯与羟苯丙酯的分离度R2=8.8，完全分离，色谱图见图1。 3.2线性试验 精密称定羟苯乙酯对照品约30 mg，置入50 mL量瓶中，加水适量，水浴加热溶解，冷却至室温，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密量取该贮备液3，4，5，6，7 mL，分别置入100 mL量瓶中，加水定容至刻度，摇匀。分别精密量取10 gL注入色谱仪，记录色谱图，以峰面积(y)为纵坐标，进样浓度(C)为横坐标进行线性回归。回归方程y=53 113C－5 727，r=1.0000。 结果表明，在0.017 7～0.041 3 mg／mL范围内，羟苯乙酯峰面积与浓度呈良好的线性关系。 3.3精密度试验 取3.2项中间浓度的溶液，连续重复进样5次，测得峰面积RSD(n=5)为0.2％，相对保留时间RSD(n=5)为0.3％。 3.4重复性试验 取同一批样品(含羟苯乙酯300ug／mL)6份，分别精密量取1 mL置入10 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；取羟苯乙酯对照品适量，精密称定，加水溶解并稀释成每1mL含30ug的溶液，作为对照品溶液。分别吸取10 uL注入色谱仪，按外标法以峰面积计算含量，RSD(n=6)为0.4％。 3.5回收率试验 分别称取羟苯乙酯对照品适量，精密称定，用羟苯乙酯阴性溶液溶解并稀释成含羟苯乙酯浓度约0,24，0.30，0.36 mg／mL的溶液，分别精密量取1 mL置入10 mL量瓶中，加水稀释到刻度，摇匀，各取10uL注入色谱仪，计算平均回收率100.4％，RSD(n=9)为1.0％。 3.6稳定性试验 取3.4项其中1份供试品溶液，在室温下放置0，24，48，72，96 h后，分别进样测定，每次测试时间点，均重新制各对照品溶液，以外标法计算含量，平均含量值为100.3％，RSD(n=6)为0.6％。 3.7样品测定 制备对照品溶液和样品溶液，分别进样lO uL，按外标法计算含量。批20091 105，20091 106，含量分别为100.1％，100.7％，100.4％。色谱图见图2。 4　讨论 本研究建立HPLC测定盐酸左氧氟沙星滴眼液中防腐剂羟苯乙酯的含量，方法简便，系统精密度和重复性好，色谱条件耐受性好，流动相中盐的浓度低(0.005 moL／L)，整个色谱系统稳定，可有效检测出产品中羟苯乙酯的含量，为产品质量提供了可靠保证。 1