HPLC法测定葶苈降血脂片中熊果酸含量探析.docVIP

HPLC法测定葶苈降血脂片中熊果酸含量探析摘　要：目的：建立葶苈降血脂片中熊果酸的含量的测定方法。方法：采用高效液相色谱法．色谱柱为ZORB-AX SB－C18色谱柱(4.6mm×150mm，5μm)，检测波长为215mm，流动相为甲醇－水－醋酸铵－乙腈(9:25:0.8:65)，柱温为室温，流速为1.0mLmin-1。结果：熊果酸的含量在72－360μg范围内与峰面积呈良好的线性关系，r=0.9995，平均回收率为100.3％(n=5)。结论：方法操作简便，快速，结果准确可靠。 关键词：HPLC法；葶苈降血脂片；熊果酸；含量测定 中图分类号：R285.5　文献标识码：A 文章编号：1673－7717(2007)07－1504－02 葶苈降血脂片，由葶苈子、山楂、茵陈、黄芩、泽泻、大黄、木香7味药物提取精制而成。具有宣通导滞、通络散结、消痰渗湿的功能，可用于高脂血症。其中山楂为药食两用的药材，为蔷薇科植物山里红Crataegus pinnatifida Bge.var.major N.E. Br．或山楂Crataegus pinnatifida Bge的干燥成熟果实，具有消食健胃、行气散瘀的功效。据文献报道，山楂中含有熊果酸等三萜类成分。研究发现其具有较显著的免疫作用和抗促癌，抗致癌。诱导F9畸胎瘤细胞分化和抗血管生成作用。原质量标准为薄层扫描法测定样品中熊果酸的含量，操作复杂，且受诸多不易控制因素影响，如薄层板的均匀性，点样的准确度，层析时的蒸汽饱和度，温度，喷显色剂的量和均匀度，显色时温度差异，相对湿度等，直接导致定量分析结果重现性，精密度，稳定性欠佳。为了更加有效、方便控制其内在质量，确保其疗效，在参考文献资料及实验研究的基础上建立了样品前处理简单，操作方便，快速，结果准确可靠的高效液相色谱法测定本制剂中熊果酸的含量，并参考文献中的流动相，选择并优化色谱条件等，现介绍如下。 1　仪器和试剂 Aglent 1100 series型高效液相色谱仪(美国)。Agilentaerial泵及VWD检测器。SB2200－T型超声波清洗器。BS－210S型电子天平(德国)。熊果酸对照品(供含量测定用)由中国药品生物制品检定所提供；葶苈降血脂片(规格每片0.3g，批号20020301由福建某药业有限公司提供。甲醇、乙腈均为色谱纯。水为超纯水，其它试剂均为分析纯。 2 色谱条件 色谱柱：ZORBAX SB－C18(4.6mm×150mm，5μn)；流动相：甲醇－水－醋酸铵－乙腈(9：25：0.8：65)；检测波长：215nm。柱温为室温；流速为1.0mLmin-1；样量为10μL；熊果酸色谱峰与相邻峰之间的分离度大于1.5；理论塔板数按熊果酸的峰计不低于5000。 3　溶液的制备 3．1 对照品溶液取熊果酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含0.072mg的溶液。 3．2 供试品溶液取本品36片，除去包衣，精密称定。研粉，精密称定约10g，置碘量瓶中，加乙醚120mL，超声提取约3h，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10mL容量瓶中，并稀释至刻度，摇匀。即得。 4　方法考察 4．1 线性关系精密量取3．1项下对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL于10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度。按上述色谱条件，进样10μL，进行测定。回归方程为A=1625.8C－6.138，r=0.9995结果表明熊果酸含量在为72－360μg范围内，与峰面积呈良好的线性关系。 4．2 重复性试验样品5份，每份约11g。精密称定，均按“3．2”项下方法制成供试品，并在上述的色谱条件下测定，测得熊果酸峰面积积分值的RSD为2.2％(n=5)。表明重复性良好。 4．3　精密度试验同一供试品溶液，连续进样5次，测得峰面积RSD=1.6％(n=5)，表明精密度良好。 4．4 回收率试验取已知含量的葶苈降血脂片(批号5份，各取18片，去包衣，研粉，精密称定约5g，于每份中分别精密加入1mL熊果酸对照品溶液(精密称取8.53mg对照品，置10mL容量瓶中，甲醇定容)，挥去甲醇，按“3．2”项下方法提取，制备供试液，并在上述的色谱条件下测定含量，记录色谱图，计算熊果酸回收率，见表1。结果表明回收率高。 4．5 稳定性试验同一供试品溶液，按上述色谱条件，定时进样测定，分别在0、2、4、8、24h进行测定，测得供试品中熊果酸峰面积积分值的RSD=2.6％(n=5)。结果表明在24h内供试品溶液是稳定性良好。 4．6 阴性试验按上述色谱条件，吸取对照品溶液、供试品溶液及缺山楂“3．2