HPLC法测定风痛安胶囊中连翘苷含量.docVIP

HPLC法测定风痛安胶囊中连翘苷含量摘要 目的：建立风痛安胶囊中连翘苷的含量测定方法。方法：采用Zorbax Eclipse XDB-C18（150×4.6，5μm）；流动相：乙腈―水（15：85）；检测波长为277nm；柱温30℃。结果：连翘苷进样量在0.0472～0.944μg范围内呈良好的线性关系（r=0.9998），样品平均回收率为96.44%，RSD=1.34%。结论：此方法操作简便、专属性强、灵敏度高、重现性好，可用于风痛安胶囊中连翘苷的含量控制。 关键词 HPLC法 风痛安胶囊 连翘苷 含量测定 风痛安胶囊收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂第四册，由防己、连翘、黄柏、忍冬藤等11味中药组成，具有清热利湿、活血通络的功能。用于急、慢性风湿性关节炎，慢性风湿性关节炎活动期。连翘在处方中用量最大，连翘苷是连翘中的主要成分，具有清热解毒、消肿散结的功效，因此建立风痛安胶囊中连翘苷的含量测定方法加以控制质量具有科学依据。本文建立了风痛安胶囊中连翘苷的含量测定方法，为更加有效的控制风痛安胶囊的质量提供了参考。 1 仪器与试药 Agilent 1200高效液相色谱仪，梅特勒XS105DU分析天平。连翘苷（中国药品生物制品检定所，批号：110821-200711）；风痛安胶囊（标示为吉林省辉南辉发制股份有限公司生产）。水为娃哈哈纯净水，乙腈为色谱纯（默克公司），其余试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 色谱条件：色谱柱为Zorbax Eclipse XDB-C18（150μm×4.6，5μm）；流动相：乙腈―水（15∶85）；检测波长为277nm；柱温30℃；流速1.0ml/min；进样量5μL。理论板数按连翘苷峰计算大于3500。 2.2 对照品贮备液的制备：称取连翘苷对照品0.01180g，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。 2.3 供试品溶液的制备：取本品内容物，研细，称取约2.5g，精密称定，精密加甲醇25ml，称定重量，超声处理30min，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，置中性氧化铝柱（100～120目，4g，内径1～1.5cm）上，用70%乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，残渣用50%甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 2.4 线性关系考察：精密量取上述对照品贮备液1ml，置5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得对照品溶液。再精密吸取对照品溶液1、3、5、10、15、20μL分别注入液相色谱仪（每份重复进样2次），按上述色谱条件测得峰面积。以峰面积为纵坐标，以连翘苷进样量为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y=436.2X－3.978（r=0.9998），表明进样量在0.0472～0.944μg范围内呈良好的线性关系。 2.5 精密度：以重复性试验考察，分别称取编号为01的供试品6份，按“2.3”项下方法制备并测定含量，结果RSD=0.77%；再分别精密吸取对照品溶液5μL重复进样6次，结果其峰面积RSD=0.13%，表明精密度良好。 2.6 稳定性：取供试品溶液于制备后2、4、8、12、24、32h分别进样5μL，峰面积值的RSD=0.96%，表明样品溶液在32h内稳定。 2.7 回收率：精密称取编号为01的供试品（含连翘苷：0.55mg/g）6份，分别精密加入对照品贮备液适量，再“2．3”项下方法制备并测定含量，计算样品加样回收率（结果见表1）。平均加样回收率为96.44%，RSD=1.34%。 2.8 阴性空白试验：取处方中除连翘外的另10味药按制法制成阴性样品，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液，并按上述色谱条件测定。结果在连翘苷对照品峰相应的位置未见其它的干扰峰（见图1）。 2.9 样品的含量测定：3批样品按“2.3”项下方法和上述色谱条件，以峰面积计算连翘苷的含量，结果见表2。 3 小结 文献中尚未见有关风痛安胶囊中连翘苷的HPLC含量测定方法的报道，而连翘具有清热解毒、消肿散结的功效，是风痛安胶囊中清热通络作用的主要发挥，故参照2005年版中华人民共和国药典连翘项下方法选择乙腈-水（25∶75）作为流动相，但实验结果表明在此比例流动相下连翘苷峰未能达到基线分离，调整比例至乙腈-水（15∶85）后能得到较好的分离，理论板数达到3000以上，分离度3.5，而且分析时间也未超过30分钟，适合日常分析。提取过程中曾选用回流提取30min或超声处理30min后，直接过滤后进样，实验结果显示干扰成分较多，基线噪声较大，影响分析准确度。后参考药典连翘项下提取方法，取滤液过中性氧化铝柱后蒸干定容，