HPLC法测定饮料中亮蓝含量不确定度研究.docVIP

HPLC法测定饮料中亮蓝含量不确定度研究测量不确定度在检测、校准和合格评定中具有重要作用，中国实验室国家认可委员会(CNAL)要求经CNAL认可的检测实验室必须建立测定不确定度的评定程序，并有能力对每项数值要求的测量结果进行不确定评定[1]。为了在测量数据的处理、测定结果的表达和测量结果质量评定等方面与国际接轨，根据“测量不确定度评价和表示”(JJFl059-1999)[2]，对高效液相色谱法(HPLC)测定饮料中亮蓝含量的不确定度的测定和评定，分析了使用外标法单点定标测定样品的不确定度计算方法和步骤，建立了高效液相色谱法测定方法的评定方式，通过对测量结果的不确定度评定，了解了测定过程中不确定度的主要来源，从而对在检测过程中易产生不确定度的环节加以重视，确保检验结果的可靠性。 资料与方法 （1）检测方法：采用GB/T5009.35-2003方法[3]测定饮料中亮蓝含量，由国家标准物质中心提供的编号为GBW(E)100001a亮蓝标准溶液0.50mg/ml，经稀释10倍后得到0.050mg/ml，吸取5.00ml样品，加水定容至50ml，经0.22μm滤膜过滤，进高效液相色谱仪测定，记录其峰面积。用单点法进行定量测定。 （2）测量数学模型： X=C?0A?xV1A?0×V2 式中X：样品中亮蓝的含量，mg／ml；C?0：标准使用溶液浓度，mg／ml；V1：样品取样量，ml；A?x：样品溶液的峰面积；A?0：标准溶液的峰面积；V2：样品稀释液总体积，ml。 （3）不确定度计算公式：按不确定度传播律，由公式X=C?0A?xV1A?0×V2 导出方差：? （4）确定不确定度的来源：待测样品不确定度由以下三个方面组成：①样品稀释引起的U(V2)，包括50ml容量瓶允差、容量瓶刻度读数、容量瓶校准和使用温度引起的不确定度。样品取样引起的U(V1)，包括5ml移液管允差、5ml移液管读数重复性、移液管校准和使用温度引起的不确定度。②进样液中浓度的U（X），包括样品重复测定、标准重复测定以及标准溶液引起的不确定度。而标准溶液引起的不确定度又由5ml移液管、标准储备液和标准使用液体积组成。 （5）计算标准不确定度：第一，标准溶液引起的不确定度U(C?0)/C?0由国家标准物质中心提供的编号为GBW(E)100002亮蓝标准溶液0.50mg/ml，经纯水稀释10倍后得到0.050mg/ml，即用5ml单标线移液管取5ml标准溶液稀释到50ml，现分别算出由标准溶液储备液，5ml单标线移液管，50ml容量瓶引起的不确定度。①由标准溶液储备液引起的不确定度［U(Cs)］亮蓝标准溶液由国家标准物质研究中心提供(编号：GBW(E)100002)，其证书上给出标准物质的相对不确定度为1％，取K=2，则：U(Cs)/Cs=0.5％ ②由5ml A级单标移液管引起的不确定度［U（Vs）］： a.校准：A级5ml单标移液管的容量允许误差为±0．02ml，取K=3，则U(Vs?1) =0．02/3=0．012ml； b.重复性：A级5ml单标移液管读数重复性为±0．01ml，取K=3，则U(Vs?2) =0．01/3=0．006ml； c.温度：由移液管校准温度与使用温度差别引起的不确定度U(Vs?3)在实验中测得水温T?t=26℃，容量器皿校准温度为T?20=20℃。? 95％置信概率的正态分布取K=2，则：? ③由50mlA级单标线容量瓶引起的不确定度［U（V?0）］ 校准：50mlA级单标线容量瓶的容量允许误差为±0．10ml，取K=3，则U（V?01）=0．10×3=0．06ml； 重复性，级50ml单标线容量瓶读数重复性为±0．02ml，取K=3，则U（V?02）=0．02×3=0．012ml； 温度：由容量瓶校准温度与使用温度差别引起的不确定度U（V?03）在实验中测得水温T?t=26℃，容量器血校准温度为T?20=20℃。 95%置信概率的正态分布取K=2，则： ②样品溶液重复进样5次测定峰面积如下： 平均值A?x=332518 样品溶液峰面积的标准不确定度按贝塞尔公式计算 第三，由样品取样量引起的不确定度U（V1） 与5.1.2标溶液引起的不确定度相同，即：U（V1）/V1=0.27%； 第四，由样品稀释引起的不确定度U（V2） 与5.1.3标准溶液引起的不确定度相同，即：U（V2）/V2=0.14%； （6）合成相对标准不确定度U?c（x）?rel 结 论 用高效液相色谱法测定饮料中亮蓝的含量，当置信概率P=95％时，则扩展相对不确定度为1.56×10?-2。其不确定度主