HPLC法测定盐酸奥洛他定滴眼液含量.docVIP

HPLC法测定盐酸奥洛他定滴眼液含量摘要：目的建立HPLC测定盐酸奥洛他定滴眼液含量的方法。方法以十八烷基键合硅胶为填充剂，流动相0.05mol/L磷酸二氢钾-乙腈-三乙胺(760：240：2)，用磷酸调pH至4.5，检测波长254nm，流速1.0mL/min。结果盐酸奥洛他定在0.05～0.15rag/mE范围内呈良好的线性关系(r=0.999 7)，平均回收率100.2％(n=9)，RSD=0.99％。结论HPLC方法简便灵敏准确，重复性好，可用于盐酸奥洛他定的质量控制。 关键词：盐酸奥洛他定滴眼液；盐酸奥洛他定；高效液相色谱法；含量测定 中图分类号：R988.1 文献标识码：A 文章编号：1672-979X(2010)03-0108-02 盐酸奥洛他定(olopatadinehydrochloride)是由日本协和发酵公司研发上市的一种新型相对选择性高的组胺H1受体拮抗剂，既能控制肥大细胞释放组胺，又对组胺H1受体有选择性高、疗效强的拮抗作用。0.1％盐酸奥洛他定对过敏性结膜炎有良好的疗效和安全性，临床效果好。 1　仪器与试剂 1.1　仪器 2695系列高效液相色谱仪，包括2996PAD检测器与Empower色谱工作站(Waters)；CP225D电子分析天平(Sartorius)：80-2台式低速离心机(上海手术器械厂)。 1.2　试剂 盐酸奥洛他定对照品(北京科联特医药公司，含量99.0％)；盐酸奥洛他定滴眼液及空白基质(本公司自制，样品批20081024，200810251空白基质批；超纯水；乙腈(色谱纯，Dikma Technology Inc.)；其他试剂均为分析纯。 2　实验方法及结果 2.1　色谱条件 色谱柱：Waters Symmetry C18(4.6mm×150mm，5μm)：流动相：0.05mol/L磷酸二氢钾-乙腈-三乙胺(760：240：2)。用磷酸调pH至4.5；流速1.0mL/min；检测波长254 nm。 2.2　溶液配制 2.2.1　对照品溶液制备　精密称取盐酸奥洛他定对照品25mg，置入25mL量瓶，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密吸取1mL置入10mL量瓶，用甲醇稀释至刻度，摇匀。 2.2.2　供试品溶液制备　精密量取盐酸奥洛他定滴眼液1mL至10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，3 000 r/min离心15min，取上清液备用。 2.3　绘制标准曲线 精密称取盐酸奥洛他定对照品25mg置入25mL量瓶，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取0.5，0.8，1，1.2及1.5mL置入10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。分别取不同浓度的对照品溶液10gL自动进样，记录色谱峰面积。以峰面积A为纵坐标，浓度C(mg/mL)为横坐标，绘制标准曲线。盐酸奥洛他定在0.05～0.15 rag/mE范围内与峰面积呈良好的线性关系，回归方程：A=12 419 249 C-30 618，r=0.999 7。 2.4　系统精密度试验 取0.1mg/mL盐酸奥洛他定对照品溶液，连续进样6次，盐酸奥洛他定含量测定RSD=0.52％，表明方法有较好的系统精密度。 2.5　重复性试验 按2.2项配制对照品溶液和由同一批样品配制6份供试品溶液，取以上溶液10μL自动进样，记录色谱峰面积，用外标法测定含量，平均含量101.9％，RSD=1.01％。 2.6　回收率试验 精密称取盐酸奥洛他定对照品约12.5，25，37.5mg各3份，分别置入25mL量瓶，加适量空白基质，超声溶解，再用空白基质稀释至刻度，摇匀。再取1mL置入10mL量瓶，用甲醇稀释至刻度，摇匀，配制成3个水平9份供试品溶液。按2.2项配制对照品溶液。取以上溶液各10μL自动进样，记录色谱峰面积，用外标法计算平均回收率为100.2％，RSD=0.99％，结果见表1。 2.7　稳定性试验 按2.2项配制对照品溶液和供试品溶液，取10μL自动进样，记录色谱峰面积，用外标法计算含量。将供试品溶液置于室温下，取4，24，48h新配制的对照品溶液和上述供试品溶液10μL自动进样，计算48h内盐酸奥洛他定含量的相对变化为1.57％，表明供试品溶液在48h内稳定，结果见表2。 2.8　样品含量测定 分别取3批盐酸奥洛他定滴眼液(批20081024，按2.2项配制对照品溶液和供试品溶液，按上述方法测定，含量分别为100.0％，102.9％，103.3％。 3　讨论 本分离系统中流动相不