HPLC法测定柴芍止痛颗粒中芍药苷含量 .docVIP

HPLC法测定柴芍止痛颗粒中芍药苷含量 摘　要：目的：建立HPLC法测定柴芍止痛颗粒中芍药苷含量的方法。方法：高效液相色谱法。HypersilODS2(4.6mmx250μm，5μm)，流动相：乙腈-0.1％磷酸溶液(15：85)。流速：1ml/min，检测波长：230nm。结果：芍药苷在0.2―1.6gg间呈良好线性关系，r=0.9998，回收率98.60％，RSD为1.34％。结论：该方法重复性好、简便易行，可作为柴芍止痛颗粒中芍药苷含量的质控方法。 关键词：柴芍止痛颗粒；芍药苷；高效液相色谱；含量测定 柴芍止痛颗粒系本院科研制剂，方由白芍、柴胡、陈皮、甘草、厚朴等8味药材组成，具有理气消胀、和胃止痛之功，主要用于肝胃不和、脘腹疼痛诸症，疗效显著。白芍为方中主药，白芍含有的芍药苷是本方的有效成分之一。为了有效控制产品质量，笔者采用HPI~法测定柴芍止痛颗粒中芍药苷的含量，并对6个批次柴芍止痛颗粒中芍药苷的含量进行测定 ，方法及结果如下。 　 1　仪器试药与试剂 1．1仪器Waters6(g)高效液相色谱仪及双波长紫外吸收检测器(美国Waters公司)；万分之一分析天平(北京Sarto-flus有限公司)。 1．2试药与试剂芍药苷对照品(定量测定用，中国药品生物制品检定所)；柴芍止痛颗粒(本院制剂室生产)；乙腈为HPLC专用试剂，其余为分析纯。 2 方法与结果 2．1 色谱条件及系统适用性试验十八烷基硅烷键合硅胶柱：HypersilODS2(4.6mm×250mm，5μm，大连依利特公司)；流动相：乙腈-0.1％磷酸溶液(15：85)；检测波长：230nm；柱温：室温；流速：1.0mL/min；进样量为10μL；理论板数按芍药苷峰计算不低于3000。 2．2对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重芍药苷对照品约10mg，加甲醇制成每1mL含1mg：的对照品储备液。吸取该储备液分别加甲醇制成浓度为0.1、0.08、0.04、0.02、0.01mg/mL的系列标准液。 2．3供试品制备精密称取柴芍止痛颗粒5g，置100mL量瓶中加甲醇适量，超声(功率250W，频赢50Hz)提取30min取出，放冷后加甲醇定容至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液为供试液，即得。 2．4空白试验原方去白芍，按制剂工艺制备成干浸膏粉即得空白样品，按样晶供试液的制备方法制备空白对照液，进行检测，结果空白样品色谱在芍药苷相应保留时间上没有色谱峰。 2．5 线性关系考察分别精密吸取芍药苷各浓度对照品溶液10μL，注入高效液相色谱仪测定，以峰面积积分值为纵坐标(y)，芍药苷进样量(μg)为横坐标(x)绘制标准曲线，其线性回归方程为：y=77768x+1629.5，r=0.9998。结果表明，芍药苷在0.2-1.6μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。 2．6精密度试验精密吸取芍药苷对照品10μL，重复进样5次，芍药苷峰面积积分值RSD=1.82％，说明仪器精密度好。 2．7 重复性和稳定性试验取同批样品，按供试品溶液制备方法平行制备5份供试液，分别测定芍药苷含量，计算平均相对偏差为1.4％，说明本法的重复性良好。取其中1份供试品溶液分别在制备后0，2，4，8，12h进样，检测芍药苷的峰面积，计算平均相对偏差为2.1％说明芍药苷在12h内基本保持稳定。 2．8 回收率试验采用加样回收法。取已知含量的柴芍止痛颗粒样品，加入芍药苷对照品适量，按供试品溶液制备方法制备供试液，并依法进行测定，计算加样回收率，结果见表1。 2．9样品测定分别精密称取不同批号柴芍止痛颗粒6批，按供试品溶液制备方法制备，测定其中芍药苷的含量，结果见表2。 　 3 讨论 从6批样品测定结果来看，每1g柴芍止痛颗粒中芍药苷含量最高2.184mg，最低1.859mg，由于样品和累的批次不够多，考虑到标准差的上下限，故暂定本品含芍药苷的含量每克不得少于1.7mg。 测定波长的选择，采用紫外分光光度计测定，芍药苷的紫外吸收在231nm处有最大吸收，参考药典及文献中的最大吸收波长，选择230nm为检测波长。本HPLC法测定柴芍止痛颗粒中芍药苷的含量，提取方法简单，分析快速，精密度高，重现性好，空白无干扰，能较好控制本品质量。 1