HPLC法测定感愈片中葛根素含量.docVIP

HPLC法测定感愈片中葛根素含量摘 要 目的：建立测定感愈片有效成分含量的方法。方法：采用HPLC对感愈片中葛根素的含量进行测定。结果：葛根素在0.040～0.20μg时具有良好的线性关系，平均回收率为101.82%，RSD=1.45%(?n?=5)。结论：该方法灵敏、重现性好，适用于感愈片中葛根素的含量测定。? 关键词 感愈片 葛根素 高效液相色谱法? 资料与方法? 仪器与试剂：美国Waters2487-600高效液相色谱仪；Aglient-C18柱；德国SartoriusBP211D(1/10万)电子天平；葛根素由中国药品生物制品检定所提供；甲醇为色谱纯；其他试剂均为分析纯。? 色谱条件：色谱柱，Aglient-C18（4.6mm×250mm，5μm）；流动相，乙腈:水:磷酸（10:90:0.1）；流速，1.0ml/分；检测波长，250nm；柱温，30℃。? 对照品溶液的制备：精密称取葛根素对照品5mg，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。①供试品溶液的制备：取本品装量差异项下的内容物，混匀，研细，取约1g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇100ml，称定重量，超声处理45分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，置蒸发皿中蒸干，残渣用甲醇定容至25ml，摇匀，即得。②阴性对照品溶液的制备：取缺葛根的样品2.0g，照供试品溶液的制备项下同法操作，即得。? 线性关系考察：精密吸取葛根素对照品溶液（20.8μg/ml）2、4、6、8、10μl分别注入液相色谱仪，依法测定，根据对照品的峰面积积分值，对葛根素的进样量绘制标准曲线，得回归方程：Y=1.7548×105X-1.6127×104，r=0.9998。结果表明：葛根素在0.040～0.20μg时呈良好的线性关系，由于标准曲线经过原点，故采用外标一点法。色谱图见图1。? 方法学考察精密度实验：分别吸取10μl的对照品溶液，重复进样5次，测得其峰面积的RSD为1.28%。稳定性试验：精密吸取对照品溶液10μl，于0、2、4、24、36小时分别依法测定，结果峰面积的RSD为1.01%，葛根素在36小时内测定结果稳定。重现性实验：精密称取同一批样品5份，按供试品溶液的制备和测试方法测定，结果供试品含量的RSD为0.96%。回收率实验：精密称取样品5份，分别加入葛根素对照品一定量，按上述操作，测定，并根据样品含量及葛根素对照品加入量，计算回收率。结果平均回收率为101.82%，RSD为1.45%(?n?=5)。? 样品测定：依法测定060301、060302、060303三批样品结果见表1。? [CSX] 结 论? 经过多次实验，现本品中葛根素含量暂定为每片不得低于0.47mg。? 讨 论? HPLC常用的定量方法有标准曲线法，分为外标法和内标法：①外标法，在液相色谱中用得最多。②内标法，准确但是麻烦，在标准方法中用得最多［2］。? 葛根素的物理性质：白色针状结晶（甲醇-醋酸），熔点187℃（分解），(a)21D＋18.14（C=1，甲醇）。成分来源：豆科植物葛Pueraria lobata（Willd.）Ohwi根，野葛P.thunbergiana Benth.根。适应证：①缺血性心脏病、冠心病、心绞痛、心肌梗死。②缺血性脑血管病：脑血管痉挛、脑梗死、脑血栓形成。③眼底病（如视网膜动、静脉阻塞、视神经萎缩）、内耳病（如突发性耳聋等）药理药效：①增强心肌收缩力，保护心肌细胞作用。②能扩张血管、降低血压、改善微循环。③保护红细胞的变形能力，增强造血系统功能等。? 药代动力学：随着给药剂量的增加，药物的消除半衰期（Ti/2szlig）依次降低为（11.80，10.37，4.6小时）?分布半衰期依资增加为（0.53，0.64，0.67小时），可通过血脑屏障，血浆蛋白结合率达24.60%。分别从尿、大便、胆汁中排泄。小鼠静脉注射葛根素，LD为634.3mg/kg，腹腔注射LD为1412.2mg/kg。大鼠腹腔注射葛根150，100，50mg/kg连续5周，无积蓄性毒性，对心、肝、肺、脾、肾、肾上腺及肠等脏器无明显毒性。犬静脉注射葛根素，每日50，30，15mg/kg连续5周，再观察70天，对大小便常规、血常规、SGPT，BUN、血糖均无明显影响。健康成年SD大鼠实验，剂量50，150mg/kg，对雌性大鼠胚胎及雄性大鼠生殖细胞均无致畸作用。? 流动相考察：参照《中华人民共和国药典》2005年版（一部）葛根含量测定项下测定葛根素的流动相及相关文献，通过实验摸索，流动相选用乙腈：水:磷酸（10：90:0.1）。葛根素具有较好的峰型和相对合理的保留时间和