HPLC法测定心可宁胶囊中丹酚酸B含量.docVIP

HPLC法测定心可宁胶囊中丹酚酸B含量摘要：目的：建立用高效液相色谱法测定心可宁胶囊中丹酚酸B含量的方法。 方法：采用C18柱，流动相为甲醇―乙腈―甲酸―水（30∶10∶1∶59），流速为0.8mL/min，检测波长为286nm。结果：丹酚酸B线性范围0.11～ 1.10μg，相关系数r =0.9997，平均加样回收率为99.90%，相对标准偏差RSD为0.76%（n = 6） 。结论：本法操作简便，准确，重复性好，可作为该制剂的定量分析方法。? 关键词：丹酚酸B；心可宁胶囊；高效液相色谱法? 中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1673-7717（2007）04-0810-03 心可宁胶囊由丹参、三七、冰片、蟾酥、红花、人参须等8味中药组成，具有活血散瘀、开窍止痛功能。用于冠心病、心绞痛、胸闷、心悸、眩晕等证。收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第9册[1]，现标准中只有鉴别尚无含量测定项目，丹酚酸B是丹参的活性成分，是本方有效成分之一。根据丹酚酸B的性质，采用适宜的提取分离方法，用高效液相色谱法对心可宁胶囊中丹酚酸B进行了含量测定，获得了满意结果。现报道如下。? 1仪器与试药? 高效液相色谱仪：美国Waters公司，510型泵，484型紫外检测器，TCM温度控制器及浙江大学N2000双通道色谱工作站。? 丹酚酸B对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号111562-200302）；心可宁胶囊（市售品）；制备阴性样品所需药材由浙江嘉兴东方国药饮片有限公司提供；甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯；水为重蒸馏水。? 2方法与结果? 2.1色谱条件色谱柱为Kromasil C18(150mm×4.6mm,5μm)；流动相为甲醇―乙腈―甲酸―水（30∶10∶1∶59），体积流量0.8mL/min；测定波长286nm；柱温：35℃。理论板数按丹酚酸B计应不低于2500。? 2.2对照品溶液的制备精密称取丹酚酸B对照品适量，加50%甲醇制成0.11036mg/mL的溶液，即得。? 2.3样品溶液的制备取样品约0.4g，精密称定。置具塞锥形瓶中，精密加50%甲醇50mL，称定重量，加热回流1h，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得。? 2.4阴性对照溶液的制备按处方量制备不含丹参药材的阴性样品，按样品溶液制备方法制成阴性对照溶液。? 2.5干扰试验照上述色谱条件，量取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照液各20μL，分别注入色谱仪。供试品色谱图中，在与对照品色谱图相应的位置上，有一相同保留时间的色谱峰，而阴性液在此保留时间无干扰。见图1。? 2.6 线性关系考察分别精密吸取对照品溶液（0.11036mg/ mL）1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL，分别置20mL棕色量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，即得，分别进样20μL，以峰面积积分值Ｙ为纵坐标，丹酚酸B进样量Ｘ（μg）为横坐标，绘制标准曲线。得回归方程：Y=2.837X-5.923，r=0.9997，表明丹酚酸B在0.11~1.10μg范围内呈良好的线性关系。 2.7精密度试验准确吸取对照品溶液20μL，重复进样5次，测定丹酚酸B对照品峰面积的RSD为0.91%。表明仪器精密度符合要求。? 2.8稳定性试验精密吸取新配制的同一样品溶液，分别在0、4、8、16 h进样，测定丹酚酸B峰面积，RSD＝1.27％（n=6），表明供试品溶液在16 h内稳定。? 2.9重现性试验取同一批号样品6份，按样品溶液制备方法制备及测试条件测定，结果丹酚酸B平均含量的RSD＝1.34％（n=6），表明本法重现性良好。? 2.10加样回收率试验精密称取已知含量样品（批号）6份，精密加入丹酚酸B对照品适量，照2.3项下样品溶液的制备并按上述色谱条件进行测定，经计算，平均加样回收率为99.90%，RSD=0.76%（n=6），结果见表1 。? 2.11样品测定分别精密称取不同批号的心可宁胶囊粉末约0.4g。按样品溶液制备法制备。分别精密吸取20μL，按上述色谱条件测定，3批样品中丹酚酸B的含量测定，结果见表2。 3讨论? 丹参有效成分主要有水溶性的酚酸类，包括丹参素、丹酚酸B等，脂溶性的二萜醌类，包括丹参酮ⅡA等，对丹参复方制剂中的水溶性成分测定条件的研究少于脂溶性成分。而水溶性成分的功效越来越被人们所重视。《中国药典》2005年版对丹参药材进行双含量指标控制[2]。? 提取条件的选择：根据丹酚酸B的性质，考察了加热回流、超声提取等方法，并对不同溶剂和提取时间进行了综合考察，结