三七对酒精性脂肪肝大鼠肝组织环氧合酶-2表达影响.docVIP

三七对酒精性脂肪肝大鼠肝组织环氧合酶-2表达影响蔡丹莉　陈芝芸　严茂祥　何蓓晖　项柏康 摘　要：目的：观察三七对酒精性脂肪肝大鼠肝组织环氧合酶－2(COX－2)的表达。方法：62只SD大鼠随机分为正常组、模型组、三七大剂量组、三七小剂量组和易善复组。后4组以50％酒精灌胃和白由饮用10％酒精饮料进行酒精性脂肪肝的造模，易善复组、三七大、小剂量组大鼠在造模的同时予相应的药物进行干预，连续14周后HE染色观察肝组织病理学改变、免疫组化法测定肝组织中COX－2的表达、放免法检_测血浆血栓素B2(TXB，)和6－酮－前列腺素F1α(6－Keto－PGF1α)的含量。结果：模型组大鼠肝组织出现不同程度的脂肪变，肝组织COX－2表达较正常组明显增强，血浆TXB1α、6－Keto－PGF1α含量及TXB2/6－Keto―PGF1α值较正常组明显升高。经大、小剂量三七干预后大鼠肝组织脂肪变程度较模型组明显减轻，COX－2表达明显减少TXB2、6－Keto－PGF1α含量及TXB2/6－Keto－PGF1α值也明显降低。结论：三七能明显改善酒精性脂肪肝大鼠微循环，抑制酒精性脂肪肝大鼠肝组织COX－2表达，这可能是其抗酒精性脂肪肝的作用机制之一。 关键词：酒精性脂肪肝；三七；环氧合酶－2；大鼠 中图分类号：1t285.5 文献标识码：A 文章编号：1673－7717(2007)07－1391－03 近年来酒精性肝病在我国的发病迅速增加，成为危害国民健康的又一重大疾病。酒精性脂肪肝发生在乙醇对肝脏损伤的初期，在酒精性肝病中最为常见，部分病例将发展为酒精性肝炎、肝纤维化，最终导致肝硬化，因此加强对其的研究已成为十分迫切的现实。以往的研究发现，中药三七及其提取物具有护肝、抗氧化、抗纤维化等作用。本研究采用50％的酒精建立脂肪肝大鼠模型，观察三七对酒精性脂肪肝大鼠肝组织环氧合酶－2(COX－2)表达的影响，探讨其作用机理。 1　材料与方法 1．1 实验材料，SD大鼠62只，雄性，SPF级，体重(200±20)g，由中国科学院上海实验动物中心提供。乙醇：分析纯，纯度99.7％，安徽特酒总厂生产。三七Panax notogin-seng(Burk.)F.H.Chen的产地浙江省，制成粉剂用时以蒸馏水配成混悬液。易善复胶囊：A.Nattermamlie GMBH产品。血栓素B2(thromboxane B2，TXB2)、6－酮－前列腺素F1α(6－keto－prostaglandinF1α，6－Keto－PGF1α)放免试剂盒为解放军总医院科技开发中心放免所产品，批号均COX－2多克隆抗体(工作浓度1：100)，美国Neomarkes公司产品，批号9121S4059；二步法免疫组化试剂盒PowerVisionTM－PV6001，北京中山生物技术有限公司，批号113212。 1．2 实验方法酒精性脂肪肝模型的建立：大鼠以50％(V/V)酒精10mL/Kg体重灌胃，2次/天(定时在8：00及20：00)，同时自由饮用10％(V/V)酒精饮料，并以普通大鼠饲料喂养连续14周建立酒精性脂肪肝模型。 分组及给药：购进的大鼠正常喂养1周后随机分为5组，正常组10只，不造模，以蒸馏水10mL/kg灌胃代替50％酒精和药物，自由饮用蒸馏水；模型组13只，在造模同时，再灌服蒸馏水10mL/(kg体重)；三七大剂量组和三七小剂量组各13只，在造模同时，分别灌服1.2g生药/(kg体重)和O.6g生药/(kg体重)的三七混悬液；易善复组13只，在造模同时，灌服91.2mg/(kg体重)的易善复混悬液，灌药时间固定在每天中午12：00，连续14周。 检测指标：14周未，大鼠禁食不禁水16h，以20％乌拉坦5mL/kg体重腹腔注射麻醉，腹腔静脉取血，分离血浆，放免法测定血浆中TXB2、6－Keto－PGF1α的含量。迅速取肝右叶组织，4％多聚甲醛固定，HE染色光镜观察肝组织脂肪变性的程度，酒精性脂肪肝病理组织学诊断参考中华医学会肝脏病学分会2002年南京会议制定的“酒精性肝病诊断标准。肝脂肪变程度判断标准：无肝细胞脂肪变为(一)，肝小叶内30％肝细胞发生脂肪变为(+)，30％－50％者为(++)，50％－75％者为(+++)，＞75％者为(++++)。采用免疫组化法检测COX－2在肝细胞中表达，阳性细胞表现为细胞浆和/或细胞膜棕黄色着色。判断标准：根据着色程度及着色细胞阳性范围进行计算，着色程度：不着色者为0分，着色淡者为1分，中等着色为2分，着色深者为3分。着色细胞阳性范围：无着色为0分。着色阳性细胞小于1/3为1分，着色阳性细胞1/3－1/2为2分。着色阳性细胞大于1/2为3分；将每张切片着色程度与着色细胞阳