不同提取方法对金银花中绿原酸含量测定影响.docVIP

不同提取方法对金银花中绿原酸含量测定影响摘要：目的:考察不同提取方法对金银花中绿原酸含量测定结果的影响。方法:应用乙醇回流、水蒸气蒸馏，超声、微波等方法提取金银花，采用高效液相色谱法测定金银花中绿原酸的含量。结果:微波和超声提取金银花，绿原酸含量最高，且无明显差异。结论:微波和超声提取方法提取效率高，并且简单、稳定、可行。? 关键词：金银花；绿原酸；RP-HPLC? 中图分类号：R285文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2007)04-0820-03 金银花为忍冬科植物忍冬Lonicera japonicaThunb,红腺忍冬Lonicera hypoglauca Miq,山银花Lonicera Confusa DC,或毛花柱忍冬Lonicera dasystyla Rehd的干燥花蕾或带初开的花。具有清热解毒,凉散风热的作用[1] ,系最常用的中药之一。据报道金银花所含化学成分有绿原酸,异绿原酸,黄酮化合物,芳樟醇和双花醇等[2]。主要有效成分有以下几类:①挥发油:具有抑菌抗病毒的作用；②木犀草素:具有抗菌、消炎、改善心血管功能及解痉，祛痰,抗癌的作用；③酚酸类物质:绿原酸、异绿原酸具有广谱抗菌及抗氧化的作用。由于金银花挥发油量较低，成分复杂，且鲜花与干花之间主要有效成分有明显的不同，因此金银花以挥发油作为金银花质量标准物质，在实际操作过程中，有一定困难，因此未列为主要研究内容。研究者大多认为，绿原酸，异绿原酸和木犀草素等为已知有效成分，可作为药材质量首先考查的指标。本文以金银花主要化学成分绿原酸为考察指标,通过对金银花不同提取方法的比较，了解绿原酸在提取物中的含量及提取物总收率，以确定金银花的提取方法。? 1仪器与试药? Agilent1100系列高效液相色谱仪（美国），超声清洗机(上海超声仪器厂),格兰士微波炉(广东格兰士集团有限公司),电热套(北京永光明医疗仪器厂)。? 金银花(购于武昌刘有余饮片厂,经本校生药教研室鉴定为正品)，绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所)，用于提取和分析的试剂均为分析纯，水为蒸馏水。? 2方法与结果? 2.1色谱条件? Zorbax-C?18柱（4.6mm×250mm,5μm）,流动相为乙腈-0.4%磷酸溶液(15∶85),流速1.2mL/min,检测波长327nm,柱温30℃。样品色谱图见图1。? 2.2对照品溶液的制备 [3]? 精密称取五氧化二磷真空干燥24h的绿原酸对照品6.02mg,置100mL棕色量瓶中,加50%甲醇至刻度,摇匀,制成每1mL含60.2μg的对照品溶液。? 2.3供试品溶液的制备? 2.3.1乙醇回流提取[4] 取金银花粉末（过40目）0.5g，精密称定，加入20倍70%乙醇，密塞，浸渍0.5h，乙醇回流提取1h，滤过；残渣同上法操作，合并两次滤液于100 mL量瓶中，冷却，用70%乙醇定容至刻度，摇匀，静止，上清液用0.45μm滤膜滤过即可。? 2.3.2水蒸气蒸馏提取[6] 取金银花粉末（过40目）0.5g，精密称定，加入20倍水，密塞，浸渍0.5h，水蒸气蒸馏提取1h，滤过；残渣同上法操作，合并两次滤液于100mL量瓶中，冷却，用70%乙醇定容至刻度，摇匀，静止，上清液用0.45μm滤膜滤过即可。? 2.3.3超声提取[4] 取金银花粉末（过40目）0.5g，精密称定，加70%乙醇约100 mL，密塞，浸渍0.5h，超声提取40min（功率250W，频率35kHz），取出，冷却，用70%乙醇定容至刻度，摇匀，静止，上清液用0.45μm滤膜滤过即可。? 2.3.4微波提取[7] 取金银花粉末（过40目）0.5g，精密称定，加70%乙醇约100 mL，密塞，浸渍0.5h，微波提取1min（低火），取出，冷却，用70%乙醇定容至刻度，摇匀，静止，上清液用0.45μm滤膜滤过即可。? 2.4标准曲线的制备? 精密吸取对照品溶液(60.2μg/mL)2,4,8,12,16μL分别注入液相色谱仪,以绿原酸对照品的量为因变量(Y),以绿原酸峰面积为自变量(X),计算回归方程为:Y=3182.95x－33.08,r=0.9999(n=5)。结果表明绿原酸在0.12～0.96μg范围内呈良好线性关系。标准曲线见图2。 2.5精密度试验? 在上述色谱条件下,精密吸取同一浓度的对照品溶液5μL,连续进样6针,计算,RSD=0.87%。? 2.6稳定性试验? 在上述色谱条件下,精密吸取同一份供试品溶液5μL,测定，计算含量, RSD=1.62%(n=6)，结果表明绿原酸在避光条件下放置,24h内基本稳定。?