内皮素-1在大鼠羊水栓塞发病机制中实验探究.doc

内皮素-1在大鼠羊水栓塞发病机制中实验探究摘 要 目的:探讨羊水栓塞的发病机制。方法：孕晚期Wistar大鼠30只，胎龄20天,根据注入液体不同，随机分为3组:对照组（生理盐水组）10只、羊水组10只、胎粪组10只。建立羊水栓塞动物模型，观察60分钟后处死动物。如动物在观察过程中死亡，立即剪开大鼠胸腔，取肺组织固定10%甲醛中.石蜡切片行免疫组化观察内皮素-1的表达。结果 实验组（羊水组和胎粪组）肺泡壁间质及泡浆内见免疫组化呈阳性、强阳性表达，对照组呈弱阳性。结论：内皮素-1参与了羊水栓塞的发生发展，是羊水栓塞发病的重要原因之一。 关键词 羊水栓塞 内皮素-1 过敏 我们给孕晚期大鼠输入不同性质羊水建立羊水栓塞动物模型， 取肺组织进行内皮素-1免疫组化观察，探讨ET-1在AFE中的作用机制，现将结果报告如下。 资料与方法 分组：健康妊娠晚期Wistar大鼠30只,胎龄20天,体重445～545ｇ。根据注入液体不同，随机分为三组:对照组（生理盐水组）10只、羊水组10只、胎粪组10只。 羊水收集方法：术前禁食12小时,随意饮水，按0.35mg/100g腹腔注入10%水合氯醛麻醉，仰卧固定于鼠板上，备皮75%酒精局部消毒，腹正中线切口3cm,暴露子宫，行子宫次切术，关腹。用注射器抽取羊膜腔内羊水。 制备胎粪液：切开胎鼠腹壁，取下胎鼠大肠，轻轻挤出胎粪到羊水中，与原羊水配成1%浓度的胎粪液。 制备动物模型：分离右股静脉，抽出羊水从股静脉注入剂量为0.25ｍｌ/100ｇ，将制备好的胎粪液注入胎粪组，剂量同上。 正常对照组方法同上，但注入体内的是同等剂量的生理盐水。观察60分钟后处死动物。如动物在观察过程中死亡，立即剪开大鼠胸腔，取肺组织固定10%甲醛中。 试剂：内皮素-1免疫组化试剂盒。 检测方法：①石蜡切片4μm。②脱蜡:二甲苯(Ⅰ)30分钟→二甲苯(Ⅱ)30分钟→100%乙醇(Ⅰ) 5min→100%乙醇(Ⅱ)5分钟→95%乙醇(Ⅰ)5分钟→95%乙醇(Ⅱ)5分钟→80%乙醇5分钟→蒸馏水洗。③抗原修复:0.01M枸缘酸盐缓冲液加热修复100℃5分钟，PBS冲洗。④3%H2O2阻断30分钟，。PBS冲洗5分钟X3次。血清覆盖30分钟。⑤加一抗(兔抗鼠多克隆ET-1抗体)，1∶100稀释，4℃过夜。PBS冲洗5分钟X3次。⑥二抗30分。PBS冲洗5分钟X3次。⑦三抗20分。PBS冲洗。⑧DAB发色（显微镜镜下控制），Marry’s苏木精复染。⑨脱水封片: 80%乙醇5分钟→95%乙醇(Ⅰ)5分钟→95%乙醇(Ⅱ)5分钟→100%乙醇(Ⅰ) 5分钟→100%乙醇(Ⅱ)5分钟→二甲苯(Ⅰ)30分钟→二甲苯(Ⅱ)30分钟中性树胶封片。 结果在显微镜下观察。根据着色强度不同分为：（-）为未着色，（+）弱阳性，（++）阳性，（+++）强阳性。 结 果 病理学检查 ：肺血管腔内可见角化上皮有形成分。 各组肺组织内皮素-1的表达免疫组化结果：实验组（羊水组和胎粪组）肺泡壁间质及泡浆内见免疫组化呈阳性、强阳性表达，对照组呈弱阳性（见表）。 讨 论 羊水栓塞发病率低，病情进展迅速，死亡率高，给疾病的发病机制的研究带来困难。因此建立相应的动物模型能为深人研究疾病提供载体。本实验采用自身胎鼠的羊水、胎粪制作模型，客观真实的模拟羊水栓塞的过程，符合临床发病规律。 胎粪组与羊水组中ET-1的表达增强，说明ET-1参与了AFE的发生发展，是AFE发生的重要原因之一。可能的机制为浑浊的羊水栓子进入母体血循环，在肺循环血流的冲击下，损伤血管内皮细胞，引起ET-1释放。ET-1对肺组织有直接毒性作用，使肺组织损伤加重。ET-1具有直接的致心律失常的作用，使冠脉、肺动脉收缩，肺动脉高压，组织缺血缺氧。缺氧是ET-1合成的强烈刺激因素 ，缺血缺氧可使ET-1的合成与释放增加。ET-1能增加肿瘤坏死因子（TNF-α），白介素-6（ IL-6）、白介素-8（IL-8）等炎症介质的合成和释放，增加毛细血管通透性，激活凝血系统。 IL-8和TNF-α等又能使ET-1表达增加，从而形成网络效应，致使ET-1大量释放。ET-1刺激血小板活化因子（PAF）、白三烯、组织胺及氧自由基的生成与释放，参与Ⅰ型变态反应，引起过敏性体克，羊水栓塞的发生。 包虫病人将获财政救助 （记者钱峰）卫生部疾病预防控制局日前组织起草了《包虫病外科治疗救助项目技术方案（征求意见稿）》和《包虫病外科治疗救助项目管理方案（征求意见稿）》，以科学、规范地开展包虫病外科手术治疗工作，减轻包虫病患者的痛苦。 《包虫病外科治疗救助项目管理方案（征求意见稿）》提出由国家财政安排专项经费，在包虫病防治项目