发酵液中L-精氨酸检测方法.docVIP

发酵液中L-精氨酸检测方法摘要：目的建立发酵液中L-精氨酸的定量检测方法。方法用坂口试剂（α-萘酚和 2,3-丁二酮）定量测定L-精氨酸的含量。结果最佳测定波长为525 nm，显色反应温度为30 ℃，反应时间为15 min，NaOH 浓度为15 g/L。该方法具有较高稳定性和重复性。结论本方法可对发酵液中L-精氨酸进行定量测定。 关键词：发酵液；L-精氨酸；检测方法 中图分类号：Q517文献标识码：A文章编号：1672-979X(2007)01-0018-03 Study on Determination Method of L-Arginine in Fermentation Broth HE Xiao-xian, SUN Ying, CHEN He (Shaanxi University of Science and Technology, Xianyang 712081, China) Abstract：Objective To describe a method for the determination of L-arginine in fermentation broth. MethodsThis paper studied a quantitative determination of L-arginine with α-naphthol and 2,3-Butanedione in detail. ResultsThe best results could be achieved with the determination wavelength of 525 nm, color reaction temperature of 30 ℃，response time of 15 min and 15g/L NaOH. This method had a good stability and reproducibility. Conclusion This method canbe used for the quantitative determination of L-arginine in fermentation broth. Key words：fermentation broth; L-arginine; determination method L-精氨酸（L-Arg）中的侧链胍基在碱性介质中可与α-萘酚和2,3-丁二酮的混合液反应生成紫红色物质，且此物质的吸收度（A）在一定波长范围内与精氨酸浓度呈线性关系。本实验对各种测定条件进行了详细研究，建立了用坂口试剂α-萘酚和2,3-丁二酮定量测定L-Arg水溶液和发酵液中L-Arg含量的方法。在所选定的最佳测量条件下，得到了理想的结果。 1材料与方法[1-4] 1.1主要仪器与试剂 756G分光光度计（上海光谱）；L-Arg（生化试剂）；L-Arg显色剂：α-萘酚（50 g/L）； 2,3-丁二酮-正丙酮溶液（0.002 5 mL/L）。 1.2测定步骤 25 mL比色管中，加入8 mL NaOH溶液，再加入已知浓度的L-Arg标准溶液1 mL，另在1支对照比色管中加蒸馏水1 mL，然后每管加入L-Arg显色剂1 mL，摇匀，立即水浴显色15 min，取出于室温下（20.5 ℃）一定时间内测A525nm值。各试剂用量及显色时间等参数均通过实验确定。 1.3发酵液中L-Arg的定量测定 发酵液经离心去除菌体，稀释至0~0.1 mg/mL，按上述测定步骤测定A 525nm值，按L-Arg含量的计算公式 X=0.39×A×N（N 为稀释倍数），计算L-Arg含量。 2结果与讨论 2.1NaOH浓度的确定 α-萘酚虽然仅溶于碱性溶液中，但NaOH的浓度过大会使显色剂中α-萘酚析出，溶液变得浑浊。所以需要确定NaOH浓度，使反应液保持澄清，便于使用分光光度法进行测定。对不同的NaOH浓度进行实验，NaOH浓度对A的影响如图1所示，NaOH浓度在15 g/L 时A值最大。因此，确定NaOH浓度为15 g/L。 图1NaOH浓度-吸收度曲线 2.2测定波长的确定 L-Arg与α-萘酚和2,3-丁二酮的反应液在一定的波长下有最大吸收峰，采用756G分光光度计进行扫描，结果如图2，最大吸收波长为525 nm，因此，采用525 nm作为反应液的测定波长。 波长/nm 图2波长-吸光度扫描曲线 2.3反应时间和温度的确定 在碱性条件下，精氨酸显色液在室温下摇匀后就能显色，但显色完全需反应时间较长，颜色也不稳定。水浴加热可以较快的得到