大豆异黄酮对A549细胞抑制作用实验探究.docVIP

大豆异黄酮对A549细胞抑制作用实验探究摘 要 目的：体外实验研究探讨大豆异黄酮对人肺腺癌的抑制作用。方法：MTT比色法、H-E染色及透射电镜法。结果：大豆异黄酮对A549细胞有抑制作用；HE染色及透射电镜观察发现，大豆异黄酮可以使细胞肿胀，胞膜及核膜变薄、模糊不清，导致细胞变性、坏死。结论：大豆异黄酮能够抑制A549细胞的生长繁殖；其抑制作用可能通过细胞毒性作用来抑制A549细胞生长繁殖。 关键词 大豆异黄酮 人肺腺癌 A549细胞 资料与方法 材料：人肺腺癌A549细胞株，中国科学院上海细胞研究所提供。大豆异黄酮含量为90%。 方法： 细胞培养 A549细胞培养于含10%小牛血清的RPMI1640培养基中；培养条件，37℃、5%CO?2、100%饱和湿度。 SIF处理 溶解于DMSO，配成320mg/ml原液，分装保存于-20℃。 MTT比色法(Microculture tetrazolium assay)将2×10?4个/ml的细胞悬液200μl，培养于96孔培养板。24小时后更换培养液并加入SIF，终末浓度分别为320、160、80、40、20μg/ml，设5个平行孔，另设溶剂对照和空白对照组，培养72小时，终止培养前4小时加入5mg/mlMTT20μl，吸出板中培养液，加200μlDMSO，使结晶充分溶解，用酶标仪（波长492nm）测定各孔光密度（A）值，以每组各孔A的平均值作为该组的平均A值。计算细胞生长抑制率：抑制率%=（对照组A－实验组A）÷（对照组A－空白对照组A）×100%。 H-E染色法：将细胞悬液接种于已置入盖玻片的培养板。24小时后根据MTT结果，用接近IC20的80μg/mlSIF处理，时间同上。设溶剂对照组。固定后常规H-E染色，光镜下观察。 透射电镜观察：将细胞悬液铺入培养瓶，设计及处理同上。收集细胞，常规处理，电镜下观察。 统计学处理：采用SPSS11.5软件，均数用 表示，进行One-Way ANOVA分析及SNK-q检验。 结 果 对A549细胞的生长抑制作用（见表1） H-E染色法： 经大豆异黄酮处理后，细胞肿胀，胞膜及核膜模糊不清，胞浆稀疏、淡染，变性坏死细胞增多。 透射电镜观察：大豆异黄酮组表现为细胞及线粒体肿胀、绒毛脱落、细胞空化。 各组间比较F=6.922，?P?0.001。SNK-q检验：?P?0.05。 讨 论 大豆异黄酮在生理及保健方面的作用成为当今的研究热点。各种体内外研究表明，SIF不仅能够抑制激素依赖性肿瘤--乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌的生长繁殖，而且还能够抑制胃癌、肝细胞癌、鳞癌等肿瘤的生长繁殖。同时，也有文献报道SIF对部分肿瘤细胞有增殖作用。因此，明确SIF究竟对哪些、处于哪个阶段的肿瘤有抑制作用，对哪些、处于哪个阶段的肿瘤有增殖作用意义重大，直接关系到肿瘤患者的治疗与康复。而SIF作为一种食物提取物，与我们生活息息相关。患有何种肿瘤和处于何种阶段的肿瘤患者，适宜进食或不适宜进食大豆及大豆制品，与患者的治疗及预后密切相关。 本实验MTT结果表明，大豆异黄酮能够抑制人肺腺癌A549细胞的生长，然而其抑制率达不到50%。H-E染色及透射电镜观察结果表明，SIF抑制A549细胞的生长繁殖与诱导A549细胞凋亡作用关系不大；大豆异黄酮可能通过引起细胞变性来抑制A549细胞的生长繁殖，此推理与文献Wang TC 的结论相一致。 本次实验采用的是大豆异黄酮的混合提取物，与大豆中的大豆异黄酮成分比例相近。因此，我们可以推荐患有肺腺癌的患者食用大豆及大豆制品来增强抗肿瘤能力。与此同时，研究大豆异黄酮单体的抗肿瘤作用，并制备抗肿瘤单体制剂，或许能够增大临床抗肿瘤领域，还需在此方面进行进一步的研究。 1