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广金钱草根腐病病原生物学特性探究摘要：目的：研究温度、pH、培养基、碳源和光照对广金钱草茄病镰刀茵生长、产孢以及孢子萌发的影响。方法：设置不同处理，每处理接3个平板，每项实验重复3次。结果：茄病镰刀茵生长温度范围为12―37℃，最适为20－30℃。茄病镰刀茵在pH 3.0－14.0范围内均能生长，最适pH为9.O―11.0。PDA、PSA、OMA和Czapek培养基对茄病镰刀茵生长影响不显著，但对孢子萌发率有较大影响，在Czapek培养液中孢子萌发率最高。不同碳源czapek培养基上茄病镰刀茵生长和孢子萌发率明显不同，以蔗糖扣麦芽糖为碳源的培养基茵落扩展最快。其次是葡萄糖和乳糖，果糖最差，同时以果糖、葡萄糖、麦芽耱和蔗糖为碳源的Czapek培养液孢子萌发最高，而乳糖较低。光照对茄病镰刀茵茵丝生长没有影响，但有利于产孢。 关键词：广金钱草；根腐病；茄病镰刀茵；生物学特性 中图分类号：R931.2 文献标识码：A　文章编号：1673－7717(2008)01－0147―03 广金钱草为常用中药，来源于豆科山属植物Desmodium styracifolium(Osh.)Men的干燥地上部分，收载于中华人民共和国药典(2005年版，一部)，主产地为广东、广西、海南等。广金钱草具有清热除湿、利尿通淋之功效，以广金钱草浸这膏制成的石淋通片是治疗各种结石的有效药物。近些年，广金钱草需求量增加，各地种植面积不断扩大，仅广东南药种植基地种植已达15000余亩。随着广金钱草的连年种植，病害发生日益严重。笔者2006年调查发现为害广东广金钱草生长的主要病害有8种，尤其根腐病发生最为严重和普遍，直接威胁着广金钱草的产量和质量。广金钱草根腐病的病原菌是茄病镰刀菌[Fusarium solani(Ware.)Sacc.]，该菌主要侵染广金钱草根茎，阻塞导管，导致寄主死亡。目前，大量的临床病例研究发现茄病镰刀菌可以感染人眼角膜、口角、下体等，引起真菌性溃疡。同时，寄主体内茄病镰刀菌分泌的单端孢霉烯族毒素(trlchothecene)是诱发癌症的重要因子。鉴于目前还未曾有人对广金钱草根腐病病原进行过系统研究，笔者在对广金钱草茄病镰刀菌分离鉴定的基础上，又对其生物学特性进行了研究。 1　材料和方法 1.1　病原菌分离和培养 广金钱草病株采自广州九佛镇、梅州大柘镇、湛江乌塘镇、肇庆冷坑镇以及阳江新圩镇和塘口镇6处南药种植基地。分离用培养基选马铃薯培养基(PDA)。病原菌分离采用组织分离法，切取病组织5mm×5mm，分别用70％乙醇和无菌水冲洗3次后移在PDA上培养，并进一步进行单孢分离纯化培养。纯化菌株于试管PDA斜面上冰冻保存备用。 1.2　病原菌鉴定 病原菌菌株于光学显微镜下镜检，观察菌丝以及孢子器和孢子的形状，并测量孢子器和孢子大小。按照《真菌鉴定手册》对病原菌进行鉴定，由华南农业大学资源与环境学院真菌室周国辉教授做进一步鉴定确定病原菌种名。 1.3　生物学特性实验 以下平板培养实验所用菌株取自培养6－8天菌龄的菌落，接种用菌块为5mm x5mm，每处理接3个平板。从第3天开始每天测量菌落直径，到第8天结束，共6次。实验重复3次。 1.3.1　温度设12、15、20,25,30、35,37和38℃8个处理。 1.3.2 pH用O.1％N HCl和0.1％N NaOH调制PDApH分别为3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、6.O、7.0、8.0、9.0、9.5、10.0、10.5、11.0、12.0、13.0和14.0。接种菌株后于恒温箱中培养，培养温度为28’E(下同)。计算菌落每天平均扩展速率。 1.3.3　培养基培养基设PDA、马铃薯蔗糖琼脂培养基(PSA)、5％燕麦琼脂培养基(OMA)和查彼培养基(Cza－pek)4种处理。另用不加琼脂的4种培养基配制孢子悬浮液，吸取5mL菌液于载玻片上，在100％相对湿度下保湿悬垂培养，24h后镜检孢子萌发率。萌发孢子以伸出芽管与孢子等长算作萌发。每次检查100个孢子。 1.3.4　碳源以Czapek培养基为基础培养基。将碳源分别替换成果糖、乳糖、麦芽糖及葡萄糖共5个处理，另用不加琼脂的5种培养基配制孢子悬浮液，培养和镜检方法同1.3.3。 1.3.5　光照设24h光照、12h／12h(光／暗)和24h黑暗3种处理。光照强度为3000Lx。产孢量测定是用无菌水配制含2％蔗糖的培养液25mL，倒入250mL的三角瓶内，用孔径6mm的无菌打孔器切取菌龄6天的菌块接人蔗糖培养液中，然后置于3种光照处理下震荡培养。分别在第24、36、48、60和78h光镜下血球计数板计数产孢量。 2 结果和分析 2.1