攻下清热活血中药对重症胰腺炎大鼠血清TNF-αIL-1β影响 .docVIP

攻下清热活血中药对重症胰腺炎大鼠血清TNF-αIL-1β影响 王小奇　刘庆生 摘　要：目的：观察攻下清热活血中药对重症胰腺炎大鼠血清TNF-α、IL-1β的影响。方法：胰胆管逆行注射建立大鼠模型后，分别以不同剂量的攻下清热活血中药灌胃治疗，以奥曲肽皮下注射为对照。取胰腺组织HE染色观察大鼠胰腺组织学改变，酶法测定大鼠血清淀粉酶含量，酶联免疫吸附法(ELISA法)检测血清中TNF-α、IL-1β的含量。结果：模型组大鼠胰腺组织病理评分及血清淀粉酶明显高于正常对照组(P＜0.01)；应用大、小剂量组中药和臭曲肽治疗后大鼠胰腺组织病理评分及血清淀粉酶较模型组明显下降(P＜0.05)。模型组大鼠血清TNF-α、IL-1β含量明显高于正常对照组(P＜0.05)；应用中药治疗后大、小剂量组和奥由肽后大鼠血清TNF-α、IL-1β含量较模型组明显下降(P＜0.05)。结论：攻下清热活血中药能明显改善重症胰腺炎大鼠胰腺组织病理和血清淀粉酶，抑制大鼠血清TNF-α、IL-1β含量可能是其作用机理之一。 关键词：重症胰腺炎；中药；细胞因子 近年来的研究证实，TNF-α、IL-1β等细胞因子与重症胰腺炎的发生、发展有着非常密切的关系。本研究采用3.5％牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射建立大鼠重症胰腺炎模型，检测血清TNF-α、IL-1β的含量，并观察攻下清热活血中药的作用，探讨其治疗重症胰腺炎的作用机理。 1 材料与方法 1．1 实验动物SD大鼠110只，雌雄各半，体重(250±20)g，清洁级，由浙江省医学科学院实验动物中心提供。 1．2药品及主要试剂①复方中药由生大黄、茵陈、柴胡、郁金、红藤等药物组成，杭州市中医院制剂室制成流浸膏备用。②奥曲肽(善宁)由诺华公司生产。③牛磺胆酸钠，由Sigma公司生产。④TNF-α、IL-1β酶联免疫试剂盒，美国RapidBio公司生产。 1．3动物造模110只大鼠随机分为正常组和造模组，雌雄均各半，正常组为10只，造模组100只。正常组大鼠自由饮水，标准饲料饲养。造模组大鼠造模前12h禁食，自由饮水。用戊巴比妥钠(50mg/Kg)腹腔注射麻醉，正中切口切开腹腔，行胰胆管穿刺后，以3.5％牛磺胆酸钠1mL/kg在微泵恒压下胰胆管逆行注射，然后缝合关腹。 1．4分组与给药根据预实验的情况，造模组大鼠的死亡率明显高于各治疗组，所以在动物分组时，造模组动物数量是各治疗组的2倍。造模结束后，随机将造模组动物分成4组：模型组40只、中药大剂量组20只、中药小剂量组20只、奥曲肽组20只。造模结束后即开始给药，两中药治疗组予以中药治疗，大剂量组按16.66g/kg，小剂量组按8.33g/kg，予以灌胃；西药组予以奥曲肽治疗，按16υg/kg皮下注射；模型组、正常组予以等量的生理盐水灌胃。以上均每8h1次，共3次。 1．5标本采集与检测①标本采集：造模结束后24h处死大鼠，取大鼠血清备用；取胰腺组织，以4％多聚甲醛固定。逐级酒精脱水，石蜡切片。②HE染色，于光镜下观察大鼠胰腺组织病理学改变。根据Spormann等评定标准评分。③酶法测定大鼠血清淀粉酶。④酶联免疫吸附法(ELISA法)检测大鼠血清TNF-α、IL-1β的含量。 1．6统计学方法采用SPSS for window 11.5统计学软件包进行分析；计量资料以均数±标准差(x±s)表示，分别采用方差分析及q检验；率的比较采用卡方检验。 2 结果 2．1各组大鼠的存活率情况比较 因实验操作不当(包括灌胃不当、注射不当)导致空白组死亡1只、中药大剂量组死亡1只、奥曲肽组死亡2只。剔除上述人为因素，模型组大鼠24h存活率为22.5％(9/40)，中药大剂量组24h存活率为42.1％(8/19)、中药小剂量组24h存活率为45％(9/20)、奥曲肽组24h存活率为38.9％(7/18)。各治疗组的存活率，与模型组相比，差异有显著性意义(P＜0.05)。各治疗组之间相比，差异无显著性意义(P＞0.05)。 2．2攻下清热活血中药对重症胰腺炎大鼠胰腺组织学的影响光镜下显示：模型组胰腺腺泡极度肿胀，胰腺实质内小血管扩张充血明显，出现凝固性坏死、出血明显，范围大，可及胰岛，见大量炎细胞浸润，以中性粒细胞为主，少量嗜酸性细胞、淋巴细胞，部分见脂肪坏死；各治疗组见胰腺腺泡肿胀，胰腺实质内小血管见扩张充血，坏死、出血区域较少，面积较小，可见炎细胞渗出，但程度较轻，脂肪坏死少见，部分见纤维母细胞增生。各组大鼠胰腺组织病理评分。 3 讨论　 重症胰腺炎属中医“腹痛”，“结胸”、“阳明腑实证”范畴。认为其发病特点是饮食不节、暴饮暴食、酗酒、或七情内伤，损伤肝胆脾胃、肝气邪结，脾胃运化失职，内生痰浊，浊邪