人参多糖对冷应激大鼠睾丸雄激素受体mRNA表达及血浆睾酮的影响.docVIP

　　人参多糖对冷应激大鼠睾丸雄激素受体mRNA表达及血浆睾酮的影响 ：王洪军，冯立 禇征 于宁 杨青 张志强 王立强 吴益民 【摘要】 　　目的探讨人参多糖对冷应激大鼠生殖功能的影响，研究大鼠睾丸组织雄激素受体mRNA表达与血浆睾酮变化及人参多糖的调节作用。方法采用大鼠雄激素受体（AR）cDNA探针斑点杂交法检测雄激素受体mRNA表达强度，血浆睾酮含量测定采用放射免疫分析法。结果对照组睾酮含量为（10.93±1.44） nmol·L-1，冷应激实验组为（6.06±1.78） nmol·L-1，冷应激人参多糖实验组为（8.01±1.38） nmol·L-1。实验组与对照组比较，差异显著（P＜0.05）。Dot – blot杂交结果：冷应激实验组明显弱于对照组，冷应激加人参多糖实验组弱于对照组但强于冷应激实验组。结论冷应激使睾酮水平下降，雄激素受体mRNA表达信号减弱，人参多糖可促进冷应激条件下的睾酮生成，加强雄激素受体mRNA表达。 【关键词】 冷应激 人参多糖 斑点杂交 雄激素受体 　　Abstract：Objective To study the effect of ginseng polysugar on the mRNA expression of testis tissue androgen receptor and plasma testosterone change after cold stress.MethodsRats ent group and cold stress ginseng polysugar group, testis tissue androgen receptor mRNA expression ined by rat androgen receptor cDNA probe dot blotting. Testosterone ined by radioimmunoassay kit(RIA kit). ResultsThe content of testosterone（nmol/L） ent group, 8.01±1.38 in cold stress ginseng polysugar group. There RNA expression of androgen recepter in cold stress group ore than that in cold stress group. ConclusionTestosterone has identical change RNA expression, ginseng polysugar has up regulation action for androgen receptor mRNA expression, and promote testosterone. 　　Key RNA表达结果，检测了血浆睾酮含量及人参多糖抗冷应激的生物学效应。现报道如下。 　　 1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 动物体重250～300 g成年健康雄性大鼠，购自 中国 医科大学实验动物中心，在本实验室分笼饲养，颗粒饲料，自动饮水，适应1周后进行冷应激实验。 　　1.1.2 试剂与仪器 　　肝素购自Sigma公司，EDTA、乙醚与氯化钠购自沈阳化学试剂公司，睾酮放射免疫分析试剂盒购自北京北方生物技术研究所。二甲苯、PPO、POPOP、HCl、NaOH等均为分析纯。CO2培养箱，美国Shel-Lab公司产品，型号1815TC；超净工作台，江苏苏州安泰空气技术有限公司产品，型号S-3Zf(-)质粒中，JM109宿主菌由郭志儒博士惠赠。常规方法［5］制备感受态宿主菌，并将大鼠ARcDNA重组质粒转入感受态菌中，经蓝白筛选，确定含有ARcDNA重组质粒的转化菌。根据小量扩增的电泳行为，将含有重组质粒的阳性菌大量扩增、酶切、纯化、电泳定量，制备出大鼠ARcDNA片段。应用“随机引物法”，以［α-32P］dCTP标记大鼠ARcDNA片段，作为杂交探针。取大鼠ARcDNA片段（50 ng）2 μl，煮沸变性2 min，冰浴。依次加入下列成分：5×上样缓冲液10 μl，混合未标记的dNTP(dATP、dGTP、dTTP各1 μl)2 μl， BSA(10 mg/ml)2 μl，［α-32P］dCTP(50 μCi,3 000 Ci/mmol/L)5 μl，klenoin，煮沸2 min，冰浴，加0.5 mol/LEDTA 2 μl，备用。 　　核酸杂交：各实验组与相应对照组取等量的睾丸组织总RNA进行1%变性琼脂糖凝胶电泳。然后，转移至尼龙膜上，转移时间18～24 h，80℃干烤2 h，预杂交和杂交在下列条件下进行，将载有RNA样