半胱氨酸蛋白酶抑制剂对离体大鼠海马脑片CA1区神经元低氧性损伤的影响.docVIP

　　半胱氨酸蛋白酶抑制剂对离体大鼠海马脑片CA1区 神经元低氧性损伤的影响 ：张育才 曾因明 王钧 张林 　　［摘要］目的 探讨半胱氨酸蛋白酶（Calpains）抑制剂PD150606对离体大鼠海马脑片CA1区神经元低氧性损伤的影响。方法 大鼠海马脑片随机分为单纯低氧组（Con组， n =6）、PD50组（ n =10）、二甲亚砜（DMSO）组 （ n = 8）。Con组的海马脑片应用正常的人工脑脊液（aCSF）37 ℃孵育60 min，PD50组、DMSO组的海马脑片分别用含有50 μmol/L的PD150606、含体积分数0.003 DMSO的aCSF孵育60 min，所有脑片均低氧5 min，复氧 60 min 。应用细胞内记录技术，分别记录用药前及低氧前膜电位、缓慢除极的速率、快速除极时间及快速除极的幅度，复氧60 min神经元的膜电位、神经元对细胞内注入电流及SCHAFFER旁路刺激的反应。应用碘化丙啶（PI）染色方法，计数复氧60 min海马CA1区PI阳性神经元数。结果 PD50组、DMSO组、Con组神经元用药前的基础膜电位、低氧前膜电位、快速除极时间、缓慢除极的速率差异无显著性（ P gt;0.05）。用药后PD50组神经元快速除极幅度显著低于DMSO组及Con组，差异有显著性（ F=13.711，q=6.199、6.229，P lt;0.05）。PD50组的10例神经元中有8例在复氧60 min后膜电位逐渐恢复到基础值水平，并对细胞注入电流及经SCHAFFER旁路刺激产生高幅度、持续时间短的动作电位。此外，PD50组海马CA1区PI阳性神经元明显少于DMSO组和Con组，差异有显著性（ F= 100.086 ，q=17.346、16.186，P lt;0.01）。结论 Calpains抑制剂PD150606可以显著减轻大鼠海马CA1区神经元低氧性损伤，减少低氧-复氧后神经元的死亡，促进复氧后神经元电生理功能的恢复。 　　［关键词］ 半胱氨酸蛋白酶抑制剂;海马;低氧缺血，脑 　　［ABSTRACT］ObjectiveTo investigate the effects of cysteine protease inhibitor PD150606 on hypoxic damage to neurons in CA1 region of hippocampus in rats. MethodsThe hippocampus slices ly divided into Con （ n =6）， PD150606 （PD50， n =10） and DMSO （ n =8） groups. The slices in Con group in before intracellular recording， and the slices in PD and DMSO groups ol/L PD150606 and 0.003 DMSO for 60 min before in-tracellular recording. All slices in each group in hypoxia and folloin of re-oxygenation. At the end of electrophysiological research， the slices idodide （PI） and the PI positive neurons in CA1 region in of re-oxygenation， eight out of 10 neurons in the PD group had its functional recovery. The dead neurons in PD group age to neurons and enhance the electrophysiological functional recovery of neurons in CA1 region of hippo-campus in rats. 　　［KEY gSO41.3 mmol/L，CaCl21.4 mmol/L，葡萄糖 4 mmol/L 。Calpains抑制剂PD150606，于美国Calbiochem公司;PI由Molecular Probes公司提供;二甲亚砜（DMSO）于Sigma公司。 　　1.2 方法 　　1.2.1海马脑片的制备 将SD大鼠置于麻醉箱内，麻醉前预先吸纯氧3 min，然后用体积分数0.02异氟烷（Isoflurane）麻醉，待大鼠翻正反射消失后断头，快速取脑并将脑组织放入冰冷（4 ℃）预充氧的aCSF中，沿冠状切片制备厚度为400 μm的海马脑片，放置于尼龙网上，在以