第6章第七章原核基因的表达与调控.ppt

1、螺旋-转角-螺旋基序(HTH) 1 2 3 同源异型域 Helix 1 Helix 2 Turn 2、锌指结构模型 α helix β sheet Zn2+ (a) (b) 图 (a) 锌指基序。(b) 转录因子Egr1的DNA结合域，显示多个锌指结构域。 (来源: ) C N 3、亮氨酸拉链（bZIP） L L L L L L L L 通过异源二聚化作用形成的亮氨酸拉链 L L L L L L L L L L L L L L L L Helix 2 Loop Helix 1 4、螺旋-环-螺旋基序（HLH） 二、转录激活域 简称AD，通过转录机中的其他成分的结合作用，启动位于上游激活元件UAS下游的基因进行转录。 由于该区域的存在，转录因子结合到DNA上后，能与RNA聚合酶相互作用，从而激发靶基因进行转录。 特点：不具有基因特异性 功用：基因激活 三种类型：酸性激活域 富含谷氨酰胺的激活域 富含脯氨酸的激活域 1、酸性激活域 某些转录因子的激活域含有高比例的酸性氨基酸，带有较多的负电荷并能形成亲脂性α螺旋。这种结构特征是转录激活的必要条件。各种来源转录因子除上述两个特征外，无明显序列同源性，第一个被鉴定的真核细胞转录因子活性结构域是酵母GAL4和GCN转录因子。 转录激活能力：无论位于紧邻转录起点的启动子部位，还是位于转录单位下游远距离的增强子部位，均能有效的激活靶基因转录。 2、富含谷氨酰胺的激活域 组成型表达的转录因子Sp1的两个最强的激活域中，谷氨酰胺几乎占了25%，而带负电荷的氨基酸所占的比例则非常低。这类激活域即为富含谷氨酰胺的激活域，其中富含谷氨酰胺的基序是激活靶基因转录的必要条件。 转录激活能力：位于紧邻转录起点的启动子部位能有效的激活靶基因转录，位于转录单位下游远距离的增强子部位，不能激活靶基因转录。 3、富含脯氨酸的激活域 含脯氨酸达20%-30%，主要存在于CTF/NF1转录因子的羧基端。此区域如果与另一种转录因子的DNA结合域相连就可激活转录过程。 转录激活能力：位于紧邻转录起点的启动子部位能有效的激活靶基因转录，位于转录单位下游远距离的增强子部位，仅能微弱的激活靶基因转录 三、核定位信号区（NLS） 转录因子的蛋白质本质决定了编码它的基因先在细胞核中转录成mRNA，然后进入细胞质并翻译成转录因子，经修饰后，转录因子须返回细胞核，与它所调节基因的顺式作用元件结合起转录调节的作用。（图见笔记） NLS用于帮助转录因子进入细胞质核。 NLS能被穿梭于核与细胞质之间的运输蛋白所识别，或被定位于核孔的输入受体所识别。 NLS是富于精氨酸和赖氨酸残基的短肽序列，这些短肽序列在几种转录因子中已被发现。 四、寡聚化位点 寡聚化位点是不同转录因子借以发生相互作用的功能域。它们的氨基酸序列很保守，大多与DNA结合域相连并形成一定的空间构象，如bZIP类转录因子的寡聚化位点包括1个拉链结构等。 寡聚化位点的存在利于蛋白质的二聚化，是DNA与相邻结构域结合的必要条件。 寡聚化位点空间构象的变化产生了转录机制的多样性， 从而使转录因子具有调控高等植物基因表达的能力。 * * * * * 基因中的内含子数量和大小都不 同。胶原蛋白基因长约40kb，至 少有40个内含子，其中短的只有 50bp，长的可达到2000bp * ①lac mRNA可能与翻译过程中的核糖体 相脱离，从而终止蛋白质链的翻译。因 此，存在着从mRNA的5末端到3末端的 蛋白质合成梯度。 ②在lac mRNA分子内部，A基因比Z基 因更易受内切酶作用发生降解，因此， 在任何时候Z基因的完整拷贝数要比A基 因多。 2、操纵子的融合与基因工程 pur操纵子在染色体上位于lac操纵子沿转 录方向的下游，中间只隔了一个控制细胞对T6 噬菌体敏感性的tsx基因。pur操纵子被“嫁接” 到lac启动子上，形成融合基因。因为lac启动 子是一个很强的启动子，通过它可以使较弱启 动子的转录增强。 6. 3 色氨酸操纵子与负控阻遏系统 trp体系参与生物合成，它不受葡萄糖或 cAMP-CRP的调控。色氨酸的合成主要 分5步完成，有7个基因参与整个合成过程 （图6-17）。 图6-17 细菌中色 氨酸生物合成途 径。 6. 3. 1 trp操纵子的阻遏系统 trpR基因突变常引起trp mRNA的永久型 合成，该基因产物因此被称为辅阻遏蛋 白（aporepressor）。除非培养基中有色 氨酸，否则这个辅阻遏蛋白不会与操纵 区结合。辅阻遏蛋白与色氨酸相结合形 成有活性的阻遏物，与操纵区结合并关 闭trp mRNA转录。 效应物分子色氨酸是trp操纵子所