蜡梅快速碱化因子基因CpRALF的克隆及表达分析-园艺学报.PDF

园 艺 学 报 2012 ，39 （12）：2431 –2438 http: // www. ahs. ac. cn Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com 蜡梅快速碱化因子基因 CpRALF 的克隆及表达 分析 * * 王 斌，杨汶源，孙晶晶，马 婧，李名扬 ，眭顺照 （西南大学园艺园林学院，重庆市花卉工程技术研究中心，南方山地园艺学教育部重点实验室，重庆 400716 ） 摘 要：通过随机克隆测序的方法从蜡梅花 cDNA 文库中获得快速碱化因子基因，命名为 CpRALF （GenBank 登录号为：JQ217379 ）。扩增获得的DNA 序列与 cDNA 序列一致，表明该基因不具有内含子， 包含一个 384 bp 的最大开放阅读框，编码一个长 127 个氨基酸的蛋白质。蛋白质序列同源比对发现其含 有快速碱化因子特有的 YIXY 、YXRGC 和 4 个保守的半胱氨酸以及双精氨酸结构。实时荧光定量 PCR 分 析表明该基因在蜡梅茎、根和盛开的全花中表达量较高；在花发育过程中，蕾期和衰败期表达丰度高。 在对蜡梅幼苗进行高温、低温、高盐、重金属 4 种非生物胁迫处理后，通过实时荧光定量 PCR 对 CpRALF 在幼叶中的表达量进行分析，结果表明高温、高盐和重金属能够促进该基因表达，而低温则抑制该基因 的表达，且 CpRALF 对高盐与重金属胁迫的响应比对高温和低温胁迫的响应更为显著和迅速，表明该基 因可能在蜡梅花发育以及非生物胁迫反应响应方面发挥作用。 关键词：蜡梅；快速碱化因子；基因克隆；表达分析 中图分类号：S 685.17 文献标志码：A 文章编号：0513-353X （2012 ）12-2431-08 Cloning and Expression Analysis of a Rapid Alkalinization Factor Gene CpRALF from Chimonanthus praecox * * WANG Bin ，YANG Wen-yuan ，SUN Jing-jng，MA Jing ，LI Ming-yang ，and SUI Shun-zhao （College of Horticulture and Landscape，Southwest University ，Chongqing Engineering Research Center for Floriculture， Key Laboratory of Horticulture Science for Southern Mountainous Regions ，Ministry of Education ，Chongqing 400716 ， China） Abstract ：A new plant gene was identified by randomly cloning and sequencing from cDNA library constructed from Chimonanthus praecox flowers. The gene has an open reading frame （ORF ）of 384 bp encoding a putative 127aa-polypeptide，and its mature form contains a conservative YIXY domain，a YXRGC domain and four cysteine residues characteristic to the RALF gene. This ge