Ca2+结合位点对极端嗜热α-淀粉酶ApkA高温活性和热稳定性的影响.pdfVIP

现代食品科技 Modern Food Science and Technology 2016, Vol.32, No.8 2+ Ca 结合位点对极端嗜热 α-淀粉酶ApkA 高温活性及 热稳定性的影响 曾静，郭建军，顾斌涛，张莉莉，熊大维，袁林 （江西省科学院,微生物研究所，江西南昌 330096） 摘要：开发耐高温α-淀粉酶是目前淀粉液化工艺的迫切需要，极端嗜热α-淀粉酶具有优良的高温活性和热稳定性，其高温适应 性机制研究可以为构建耐高温α-淀粉酶提供理论依据和设计思路。通过分析来源于极端嗜热古生菌Thermococcus kodakarensis KOD1 的α-淀粉酶ApkA 的氨基酸序列，构建Ca2+ 结合位点突变体ApkAdsN1 10A/D155A/D164A。酶学性质分析表明，与野生型ApkAds 相比，突变体ApkAdsN110A/D155A/D164A 的高温活性和热稳定性明显降低。其中ApkAds 的最适反应温度为90 ℃，对应的绝对酶 活为2946.75 U/mg；突变体ApkAdsN110A/D155A/D164A 的最适反应温度为8 0℃，对应的绝对酶活为917.07 U/mg。ApkAds 于90 ℃ 2+ 的半衰期约为5 h，突变体ApkAdsN110A/D155A/D164A 于90 ℃的半衰期约为2 h。本研究结果表明ApkA 中Ca 结合位点与其高温 活性和热稳定性均相关，Asn110、Asp155 及Asp164 这三个氨基酸残基的丙氨酸替换突变不利于ApkA 维持其高温活性和热稳定性。 关键词：极端嗜热α-淀粉酶；Ca2+结合位点；定点突变；高温活性；热稳定性 文章篇号：1673-9078(2016)8-90-95 DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2016.8.014 2+ Effect of the Ca -binding Site on Thermal Activity and Stability of the Thermococcus kodakarensis Hyperthermophilic α-Amylase ApkA ZENG Jing, GUO Jian-jun, GU Bin-tao, ZHANG Li-li, XIONG Da-wei, YUAN Lin (Institute of Microbiology, Jiangxi Academy of Sciences, Nanchang 330096, China) Abstract: The development of a thermostable α-amylase for use in starch liquefaction processes is urgently needed. Hyperthermophilic α-amylase possesses good activity at high temperature and thermal stability, and the study of the mechanism underlying the thermal adaptation of hyperthermophilic α-amylase could provide a theoretical basis and design concept for the construction of other thermally stable α-amylases. Based on the amino acid sequence of the α-amylase ApkA produce