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香石竹ACC氧化酶基因的克隆与植物表达载体构建_余义勋
2002, 15(3):256 260
Forest Research
:1001-1498(2002)03-0256-05
ACC
1 1 2 1
余义勋, 张俊卫, 孙振元, 包满珠
(1., 430070;2., 100093)
:ACO , , `American DNA ,
ACC , pMD18T , pBluescript S ,
ACO , 。
, 3 , 2 , 3
ACO cDNA 。
:;ACC ;;;
:S722.3 :A
(Dianthus caryophyllus L.), 。
, 。
。, 。
ACC ,(EFE),,
(ACC )。ACC RNA ,
[1]
, 。 (Lycopersicon esculentum
[2] [3] [4] [5]
Mill.) 、(Maluspumila Mill.) 、(Pisum satium Linn.) 、(Amygdaluspersica L.) 、
[6] [7] [8]
(Petunia hybrida Vilm.) 、 、(Actinidia sp.) ACC
cDNA, 1995 ACC cDNA
[1]
, ,
。`American, ACC ,
。
1 材料和方法
1.1
`American, (Escherichia coli (Migula)
Castellani and Chelmers)DH5α、(Agrobacterium tumef aciens (Smith et Townsend)Conn)
LBA4404 , pBluescript S (+)、pMOGMON
:2001-12-25
:,948 (96-04-06)
:(1973-), , , .
3 :ACC 257
, 。
1.2 DNA
[9]
DNA , 0.2 g , 1.5 mL
, ,;600 μL ,65 ℃20 min,
-1
1, 12 000 r·min 5 min, ,:(24 ∶1),
3 ;,0.6 (-20 ℃)30min,DNA;
-1
12 000 r·min 2 min ,70%;DNA,100 μL TE DNA,
4 ℃。
1.3 PCR
[7]
Wang ACC cDNA , (
[10]
), 。PCR
DNA 。
1.4 、
DNApMD18-T ,DH5α,x-gal/IPTG
,,。
1.5 ACC 、
ACC pMD18-T Pst ⅠBamH Ⅰ,
Pst ⅠBamH ⅠpBluescript S (+), 。
ACC pBluescript S (+)EcoR ⅠBamH Ⅰ,
EcoR ⅠBamH ⅠpMOGMON (35S ),
。ACC pBluescript S (+)EcoR ⅠXba Ⅰ
EcoR ⅠXba Ⅰ pMOGMON ,,
1。
1.6 ACC
DNA, RNase
RNA,:(24 ∶1)3 ,
,0.6 (-
-1
20 ℃)30 min, DNA;12 000 r·min
2 mi
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