选1.2.2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数.pptVIP

课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 专题2　微生物的培养与应用 学习目标 1、说明统计菌落数目、设置对照、土壤取样及稀释的方法。（重点） 2、掌握从土壤中分离分解尿素的微生物及进行平板计数的方法。（重、难点） 课题背景 1、尿素的利用 尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。 2、细菌能利用尿素的原因 土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶 CO(NH2)2 脲酶 + H2O + CO2 2NH3 直接原因： 能合成脲酶（分解尿素的酶） 根本原因： 具有合成脲酶相关的基因 3、常见的分解尿素的微生物 芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。 课题目的 ①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌。 ②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌。 （一）筛选菌株——分离 （二）统计菌落数目——计数 （三）实验中如何排除非测试因素对实验结果的影响？ ——对照组的设置 一.研究思路 （1）实例： DNA多聚酶链式反应(PCR)是一种在体外将少量DNA大量复制的技术，此项技术要求使用耐高温（930C）的DNA聚合酶。 (一)筛选菌株 1、自然界中目的菌株的筛选： PCR技术: 如何寻找耐高温的酶？ 解决问题的思路： 寻找耐高温环境的菌种； 寻找耐高温的DNA聚合酶 耐高温的酶 耐高温生物体 耐高温环境（热泉、火山口） 寻找 寻找 寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。 因为热泉温度70～800C，淘汰了绝大多数微生物,只有耐热的Taq细菌保留下来. 美国黄石国家公园的一个热泉 (2)启示： 原因： （1）实例： PCR技术 1966年，布鲁克在美国黄石国家公园的一个热泉中发现了水生耐热的Taq细菌，并分离到耐高温的DNA聚合酶。 2、实验室中微生物的筛选： 人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。 在微生物学中，允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，叫做选择培养基。 (一)筛选菌株 (1)原理： (2)方法： 利用选择培养基分离 (3)实例： 以尿素作为唯一氮源，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。 土壤中分解尿素的细菌的分离 如何制备选择培养基？ KH2PO4 1.4g Na2HPO4 2.1g MgSO4 .7H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL。 ①该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？ ②此培养基能否筛选出分解尿素的微生物？为什么？ 碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素 能。只有能合成脲酶的 微生物才能利用尿素作为氮源而生存。 请根据这一原理（思路），分析本课题(土壤中分解尿素的细菌的分离)用到的培养基配方： ③从物理性质看此培养基属于哪类？ 固体培养基 怎样证明此培养基具有选择性呢？ 对照组 实验组 结果 目的 是否 接种 培养基类型 以尿素为 唯一氮源 的培养基 牛肉膏 蛋白胨 培养基 ?是 筛选分解尿素的微生物 判断该培养基有无选择性 只生长分解尿素的微生物 生长多种微生物 是 1、显微镜直接计数： (1)方法 （二）菌株计数 利用特定细菌计数板或血球计数板,在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量. 计数室 计数室（中间大方格）的长和宽各为1mm，深度为0.1mm，其体积为______mm3 ，合____________mL。 1mm 0.1 1×10-4 每块计数板由H形凹槽分为2个同样的计数池。 每个计数池分为9个大方格。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 计数板是一块特制的载玻片,上面有一个特定的面积为1 mm2和高为0.1 mm的计数室,在1 mm2的面积里又被划分成25个(或16个)中格,每个中格进一步划分成16个(或25个)小格,但计数室都是由400个小格组成的。 实物图 正面图 侧面图 计数池 滴液处 计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物的一种仪器。 计数时，常采用样方法。 16个小格 25个小格 25X16 = 400小格 16X25 = 400小格 抽样检测： 5×16=80个小格 抽样检测： 4×25=100个小格 计数室 放大后的计数池 25个中格 16个中格 每个计数室（大方格）共有400小格，总容积为0.