2013-0810.免疫学与临床诊断基础.pptVIP

免疫学与临床诊断基础;*;*;免疫（Immunity）; 免疫的功能;6; 抗原;抗原的特性; 抗原决定簇（表位）;抗原决定簇是免疫应答和免疫反应具有特异性的物质基础; 抗体;免疫球蛋白;抗体的功能;抗体与抗原结合;抗体与补体结合;抗体的制备;*;抗原抗体反应原理;抗原抗体反应的特点1：高度特异性;特异性;抗原抗体反应的特点2：可逆性;可逆性;抗原抗体反应的特点3：浓度比率适宜性;;抗原抗体反应的影响因素;*;免疫学诊断概论;免疫学检测的分析学表现;免疫学检测的分析学表现;免疫学检测技术分类;凝集反应（agglutination);32;沉淀反应（precipitation);1 单向免疫扩散 (single immunodiffusion) （1）特点：定性定量试验。以数值计算为基础的单向辐射状免疫扩散试验。常用于抗原定量。 （2）用途：可用于测定血清IgG,IgM,IgA和C3等的含量 （3）原理：沉淀环的直径与抗原含量呈正相关。 （4）操作：铺板 === 打孔===加样===放湿盒 ===看结果。;35;2 双向免疫扩散(double immunodiffusion) （1）特点：定性半定量。分析鉴定抗原、抗体纯度和抗原特异性的试验。即抗原和抗体分子在凝胶板上扩散，二者相遇并达到最适比例时形成沉淀线。 （2）用途：用于抗原或抗体的定性检测、组成和多抗原相关性分析。 （3）操作：铺板===打孔 ===加样===放湿盒 ===看结果。 3 对流免疫电泳试验 其实质是将双扩与电泳相结合，又叫反向免疫电泳或免疫电渗电泳。 （1）特点：定性试验。将琼脂内电泳和凝胶内沉淀反应相结合。比琼脂扩散法的灵敏度要高10～16倍，而且反应时间短，可用于各种蛋白的定性和半定量测定。 （2）用途：主要用于病原微生物抗原的定性检测。 （3）操作：铺板===打孔 ===加样 ===电泳 ===看结果。;;4 免疫电泳 （immunoelectrophoresis) 也是将电泳技术与双向免疫扩散结合的一种技术，先电泳后双向免疫扩散 。;5 免疫比浊 （immunoephelometry） 在一定量抗体中分别加入递增量的抗原，经一定时间形成IC，液体浑浊，用浊度计测反应体系的浊度，据标准曲线推算样品中抗原含量。;补体结合反应;试验由两个阶段组成： 首先将经过56℃处理30分钟使补体灭活的抗血清，与???原及补体（通常将豚鼠血清作适当稀释后使用）混合使起反应。 第二是加入已同抗绵羊红细胞抗体相结合的绵羊红细胞（致敏红细胞）。 利用抗原抗体复合物同补体结合，把含有已知浓度的补体反应液中的补体消耗掉使浓度减低的现象，以检出抗原或抗体的试验 在最初阶段对消耗补体建立起足够的抗原抗体反应时，没有发生致敏红细胞的溶血，但补体剩余下来则引起溶血反应。用于检查梅毒的梅毒补体结合反应（瓦氏反应，Wassermann reaction）是最常进行的补体结合试验。 补体结合反应操作繁杂，且需十分细致，反应的各个因子的量必须有恰当的比例。特别是补体和溶血素的用量。;免疫标记技术;标记免疫技术=;免疫荧光技术(Immunofluorescence technique，IF);荧光抗体技术基本原理;;常用的荧光素;（一） 直接法 用特异荧光抗体直接滴加于待检抗原标本上，由于标记抗体与抗原发生特异结合，使之呈荧光，根据荧光分布和形态确定抗原性和部位。缺点是每检查一种抗原必须制备相应的荧光抗体。 （二） 间接法 间接法可用于检测抗原和抗体。抗原或标本加上抗体或标本（第一抗体）混合后，加荧光抗体（第二抗体）。在荧光显微镜下检测荧光分布。本法灵敏度高，可对多种抗原进行试验。敏感性比直接法高，制备一种荧光二抗可用于多种抗原的检查，但非特异性增多。 （三） 补体结合法补体结合法是间接法的一种改良，在抗原抗体反应时加入补体，再用荧光标记的抗补体抗体进行示踪。;（四） 双标记法 采用FITC及罗丹明分别标记不同的抗体，进行同一标本的荧光染色，若有相应的两种抗原存在便同时见到两种（橙红、黄绿）荧光。 为均相荧光免疫测定的一种类型，检测试剂为FITC标记的抗原和罗丹明标记的抗体，当两种标记物标记的抗原和抗体特异性结合后使两种荧光素靠近，由于FITC的发射光谱能被罗丹明吸收，从而使FITC的荧光明显减弱。试验时将可能含有抗原的标本与两种标记物一起反应，则能与FITC标记的抗原竞争结合罗丹明标记的抗体，从而减少罗丹明对FITC发射光谱的吸收。通过FITC荧光测定可推算出标本中抗原的量，其与荧光强度成正比。;;;在医学检验中主要用于：1. B和T细胞及亚群的鉴定；2. 自