清热抗感冲剂对大鼠NK细胞杀伤活性影响.doc

清热抗感冲剂对大鼠NK细胞杀伤活性影响(山西中医学院，山西　太原030024) 摘要：目的：通过检测清热抗感冲剂对实验性免疫低下大鼠及正常大鼠NK细胞杀伤活性的影响，探讨该方对免疫功能的调节作用。方法：选取Wistar大鼠100只，雌雄各半，随机抽取其中雌雄各25只，腹腔注射环磷酰胺4.5mg/(0.5mL)，每天给药1次，连续7天，造成免疫低下大鼠，然后随机分为模型组、中药对照组(银翘解毒片组)、西药对照组(γ－干扰素组)、小剂量组及大剂量组，保证每组雌雄各半：其余50只随机分为正常空白对照组(即生理盐水组)、中药对照组、西药对照组、小剂量组、大剂量组，同样保证每组雌雄各半。上述各组连续用药3夭后，麻醉无菌操作完整摘除脾脏，置含RPMI营养液的无茵瓶中，送检。采用流式细胞仪检测NK细胞的杀伤活性。结果：清热抗感冲荆能显著增加正常大鼠和注射环磷酰胺引起的免疫低下大鼠NK细胞杀伤活性(P＜0.05或P＜0.01)。结论：清热抗感冲剂对大鼠的NK细胞杀伤活性有明显的促进作用。 关键词：中医药研究；清热抗感冲剂；免疫调节；NK细胞 中图分类号：R285　文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2007)05-0929-03 清热抗感冲剂主要含有僵蚕、薄荷、金银花、连翘、板蓝根、桔梗、大黄等药物，具有辛凉解表、清热解毒、宣降蕴热的作用。临床用以治疗上呼吸道感染，有效率达94.16％，疗效显著。课题组以往的实验已经证实清热抗感冲剂具有抗病毒及提高血清lL-2、CD4+T细胞亚群的功能。为了深入研究该冲剂对免疫的调节作用，本实验主要从清热抗感冲剂对大鼠NK细胞杀伤活性的影响方面观察该冲剂的免疫调节作用。 1材料与方法 1.1实验材料 1.1.1实验动物 Wistar大鼠100只，体重为(200±20)g，雌雄各半，由山西省中医药研究院实验动物中心提供，合格证号：晋动(证)字A00-002号。饲养环境通风良好，饲养温度18～22℃，湿度为45％65％。 1.1.2实验药物　清热抗感冲剂(将本方药物水煎、浓缩、真空干燥，制成冲剂，每袋6g。由山西中医学院附属医院制剂室提供)；银翘解毒片(云南省腾冲制药厂提供，批号为050169，经粉碎研磨100目过筛制成散剂)；γ-干扰素(上海克隆生物高技术有限公司提供，批号；环磷酰胺(江苏恒瑞医药有限公司提供，批号。 1.13实验试剂　体外K562细胞株(北京药物所引进)；RPMI-1640培养基(山西省肿瘤医院配制)；rh Annexin V-PE(Cat.No.BM306pe,BMS公司)；PI核酸染料(Cat.No.66211E,BD公司提供) 1.1.4实验仪器　流式细胞仪(BD FACSCalibur，美国BD公司生产)，HengpingJA2003电子精密天平(上海恒平科学仪器有限公司)，离心机等。 1.2实验方法 1.2.1试剂配制　清热抗感冲剂灌胃液的制备：取清热抗感冲剂加蒸馏水溶解，分别配制成实验所需的低浓度1.134g/2mL和高浓度2.268g/2mL银翘解毒片灌胃液的制备：取银翘解毒片粉碎后，经100目过筛，制成散剂，加蒸馏水溶解，配制成浓度为227mg/mL溶液。 γ-干扰素注射液的制备：将γ干扰素加注射用水溶解成10.8万UI/mL。环磷酰胺注射液的制备：将环磷酰胺加生理盐水配制成浓度为9mg/mL的溶液。 1.2.2分组及给药 取100只大鼠，雌雄各半，随机分成两大组：①正常组：取50只大鼠雌雄各半，再随机分成5组，并保证每组雌雄各半，分别给药如下：(1)生理盐水组：生理盐水2mL/只，灌胃。(2)中药对照组：银翘解毒片水溶液灌胃227me/(1mL)。(3)西药对照组：腹腔注射γ-干扰素5．4万UL/(0.5mL)。(4)小剂量组：清热抗感冲剂水溶液灌胃1.134g/(2mL)。(5)大剂量组：清热抗感冲剂水溶液灌胃2.268g/(2mL)。免疫功能低下组：取50只大鼠腹腔注射环磷4.5mg/(0.5mL)，每天给药1次，连续7天。然后再随机分成5组，每组雌雄各半，其中一组作为对照，其余4组分别给药如上述正常组(2)～(5)组。上述各组每天给药1次，连续3天。 1.2.3标本的采集 最后1次给药24h后，20％乌拉坦注射0.8mL/只麻醉后，无菌操作完整摘除脾脏，置RPMI-1640营养液内送检(与山西省肿瘤研究所合作完成)。 1.2.4靶细胞的制备　体外K562细胞株，取在RPMI一1640培养基生长旺盛的细胞计数，用完全RPMI－1640培养基调整细胞浓度为1×106备用。 1.2.5效应细胞　无菌操作解剖实验大鼠，取脾脏放入