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炉甘石薄荷脑洗剂微生物限度检查方法建立及验证
炉甘石薄荷脑洗剂微生物限度检查方法建立及验证摘要 采用离心沉淀法与培养基稀释法,对炉甘石薄荷脑洗剂进行微生物限度检查,结果表明各验证菌回收率在70%以上,表明该方法可行。?
关键词 炉甘石薄荷脑洗剂 微生物限度??
炉甘石薄荷脑洗剂是常用的医院制剂,其成分为炉甘石、氧化锌、薄荷脑、苯酚、甘油等。具有止痒、轻度收敛、保护皮肤的作用,用于湿疹、皮炎、皮肤瘙痒症等,应对微生物限度进行控制。?
仪器与试药?
仪器:HH.BII.420电热恒温培养箱,LRH-250A生化培养箱,Sartorius BS 2002S电子天平,SA-1480-Ⅱ净化工作台,TDL80-2B离心机。?
培养基:(中检所)营养琼脂培养基,玫瑰红钠琼脂培养基,胆盐乳糖培养基,营养肉汤培养基,MUG培养基,曙红亚甲蓝琼脂培养基,溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基,甘露醇氯化钠琼脂培养基。?
方法与结果?
菌种:枯草芽孢杆菌CMCC(B)63501、金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003、大肠埃希菌CMCC(B)44102、白色念珠菌CMCC(F)98001、黑曲霉CMCC(F)98003(以上菌株均为第三代)。?
菌液制备:取经30~35℃ 培养18~24小时的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌营养肉汤培养液1ml,加0.9%无菌氯化钠至每毫升含菌50~100cfu/ml,备用。?
取经23~28℃ 培养24~48小时的白色念珠菌改良马丁培养液1ml,加0.9%无菌氯化钠至每毫升含菌50~100cfu/ml,备用。?
取经23~28℃ 培养5~7天的黑曲霉改良马丁营养琼脂斜面,用0.9%无菌氯化钠3~5ml将孢子洗脱,加0.9%无菌氯化钠至每毫升含菌50~100cfu/ml,备用。
供试液的制备:取供试品原液10ml,加pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml,混匀。吸取上述混合液30ml,以500转/分的速度离心5分钟,取上清液,以3000转/分的速度离心20分钟,弃去上清液,沉淀加pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液补至30ml,作为1∶[KG-*2]10的供试液。?
方法验证过程:验证试验进行3次独立的平行试验,并分别计算各试验菌的回收率。
试验组:细菌,取1∶[KG-*2]10供试液1ml及 50~100cfu试验菌至同一平皿中,立刻倾注营养琼脂培养基,每株菌株(大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌)做2份平行试验。霉菌及酵母菌:取1∶[KG-*2]10供试液1ml及 50~100cfu试验菌至同一平皿中,立刻倾注玫瑰红钠琼脂培养基,每株菌株(白色念珠菌、黑曲霉)做2份平行试验。?
菌液组:取菌液1ml加入平皿中,立刻加入相应的琼脂,各菌株做2份平行试验。?
供试品对照组:按试验组的方法不加菌液,测定供试品的本底菌数。?
稀释剂对照液:取上述菌液(枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌)各30ml,以500转/分的速度离心5分钟,取上清液,以3000转/分的速度离心20分钟,弃去上清液,沉淀加pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液补至30ml,取1ml至平皿中,立刻倾注营养琼脂培养基,每株菌株(大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌)做2份平行试验。
计算公式:?
结果:细菌、霉菌及酵母菌回收率试验采用离心沉淀法,稀释剂对照组及试验组的回收均在70%以上,表明可用上述方法检查细菌、霉菌及酵母菌(见表1、2)。?
控制菌(金黄色葡萄球菌、铜绿假单孢菌)检查方法的验证:菌种,铜绿假单胞菌CMCC(B)10104、金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003、大肠埃希菌CMCC(B)44102(以上菌株均为第三代)。?
菌液的制备:取经30~35℃ 培养18~24小时的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单孢菌营养肉汤培养液1ml,加0.9%无菌氯化钠至每毫升含菌10~100cfu/ml,备用。?
供试液的制备:取供试品原液10ml,加pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml,混匀。?
金黄色葡萄球菌:①试验组:取供试液10ml及金黄色葡萄球菌10~100cfu加入营养肉汤培养基100ml中,置35℃培养箱中培养18~24小时。②阴性对照组:取供试液10ml及大肠埃希菌10~100cfu加入营养肉汤培养基100ml中,置35℃培养箱中培养18~24小时。?
结果:取两组培养物分别划线于甘露醇氯化钠琼脂培养基中,试验组检出金黄色葡萄球菌,阴性对照组未检出大肠埃希菌,表明上述方法可用于检查金黄色葡萄球菌(见表2)。?
铜绿假单胞菌:①试验组:取供试液10ml及金黄色葡萄球菌10~100cfu加入胆盐乳糖培养基100ml中,置35
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