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电针对慢性情绪应激焦虑模型代谢组学探究摘要 目的：观察电针作用后，慢性情绪应激焦虑模型大鼠血浆核磁共振氢谱(Hydro-Nuclear Magnetic resonance,1H NMR)的变化，并结合模式识别方法进行分析，从代谢组学的角度探讨电针防治慢性情绪应激的机制。方法：采用不可预知的情绪应激刺激方法，建立慢性情绪应激焦虑模型。电针百会、三阴交，治疗21d，采用1H NMR检测血浆代谢谱并用正交信号校正-主成分分析（Orthogonal Signal Correction- Principal Components Analysis，OSC-PCA）判别代谢产物的变化。结果：①与对照组相比，模型组样本中3-羟基丁酯、血糖、乳酸、O-乙酰基糖蛋白等物质含量升高；氧化三甲胺、丙氨酸、血脂、牛磺酸、N-乙酰基糖蛋白等物质含量降低。②与模型组相比，模针组中血糖、极低密度脂蛋白含量明显降低；不饱和脂肪酸、磷脂酰胆碱等代谢物含量升高。结论：各组大鼠血浆1H NMR代谢谱之间存在差异，电针能明显影响慢性情绪应激焦虑模型大鼠的代谢产物。 关键词 慢性情绪应激焦虑 电针 代谢组学 核磁共振 大鼠 基金项目：四川省教育厅资助项目电针抗慢性应激性海马损伤的代谢组学研究，编号：200ZD014；成都中医药大学校基金资助项目安神针法对CES焦虑大鼠的作用研究，编号：ZRZD200502代谢组学是继基因组学、蛋白质组学等之后发展起来的以探讨机体整体代谢状态为目标的新方法，其主要特点是利用核磁共振等获得生物体内小分子代谢物的丰富信息，通过模式识别等化学计量学和多元统计分析方法对生物体代谢信息进行动态、系统的测量和分析，并联系生物体内的病理生理变化，确定导致这些代谢改变的靶器官和作用位点，寻找相关的生物标志物，达到认识机体反应过程的目的[1-2]。 临床研究表明，电针治疗焦虑障碍有其独特优势，疗效肯定[3-4]，但电针拮抗焦虑的作用机理尚待研究。最近，国内外学者采用代谢组学方法比较研究了急慢性应激对动物血浆代谢物的影响，从整体代谢的全新角度为研究抑郁症、焦虑障碍等难治性疾病提供了又一新的思路[5-7]。本研究将采用代谢组学技术初步探讨电针对慢性情绪应激焦虑模型的治疗机理，以期从体内代谢的角度为针灸防治慢性情绪应激提供部分实验依据。 1 材料与方法 1．1 实验动物及分组：SD雄性大鼠30只，体重200±20g（四川省医学科学院实验动物研究所，合格证号：No.0005328）。动物于室温23±2℃、湿度70%～80%、正常明暗周期的安静环境中适应性驯养7d，然后按体重随机分为空白组，模型组，模型+针灸治疗组（简称模针组），每组10只。 1．2 建模方法：采用不可预知的慢性情绪应激方法(Chronic Emotional Stress，CES)构建大鼠模型，根据文献[3]方法改进：用SPSS11．5统计软件包对9种刺激方式（包括电击足底、禁水、禁食、24h光照、24h黑暗、两笼混为一笼、单笼、倾斜、从两笼各抓两只混笼等）随机分配，每天安排1种方式刺激大鼠，连续刺激21d。 1．3 电针治疗：模针组大鼠每天15:00进行固定，暴露头部及四肢，针刺百会、三阴交穴(参照《实验针灸学》的动物穴位图谱，以比较解剖的骨度分寸法为依据模拟定位。百会：顶骨正中点，向后平刺5~10mm；三阴交：后肢内踝尖直上5mm处，直刺5~10mm，左右两侧交替取穴)。针柄接电针仪G6805－Ⅱ型，选用疏密波，频率2Hz/100Hz。每天1次，每次15min，连续治疗21d。空白组和模型组除每天15:00进行与模针组相同的固定外，不做其它任何处理。 1．4 样品采集及预处理：针刺治疗21d后，各组大鼠用1%戊巴比妥钠麻醉后股动脉取血，肝素抗凝获取血浆，每组随机选取6个样本进行检测。在200μL血浆中加入400μL0．9%NaCl重水溶剂(北京巨化工科贸有限责任公司)，4℃，11000转/分转速离心15min，取550μL上清液，加入含有50μL浓度为0．1%的2,2,3,3,三甲基甲硅烷基丙酸{3-(trimethylsiyl)［2,2,3,3-2H?4］propionate,TSP}(加拿大默克公司)重水溶液的核磁样品管（φ=5mm）中，Varian UNITY INOVA 600M超导脉冲傅立叶变换核磁共振仪检测。 1．5 1H NMR数据采集：调用驰豫时间编辑（Carr-Purcell-Meiboom-Gill，CPMG）观察小分子代谢产物信号，扩散编辑实验（Longitudinal Eeddy-Delay, LED）观测大分子信号。CPMG实验取如下参数：谱宽8000Hz，采样点数32k，累加次数128次，饱和时间2s，