萘联苯菲高效液相色谱分析.docVIP

萘、联苯、菲的高效液相色谱分析 实验目的 理解反相液相色谱的优点和应用； 掌握归一化定量方法。 原理 在液相色谱中，若采用非极性固定相，如十八烷基固定相，极性流动相。这种色谱法称为反相液相色谱法。这种分离方式特别适合于同系物、苯并系物等。萘、联苯、菲在ODS柱上的作用力大小不等，它们的k值不等（k为不同组分的分配比），在柱内的移动速率不同，因而先后流出柱子。根据组分峰面积大小的不同及测得的定量校正因子，就可以由归一化定量方法求出各组分的含量。 归一化定量法的公式为： 式中：Ai 为组分峰面积，fi为组分的绝对定量校正因子。 采用归一化法的条件是：样品中所有组分要流出色谱柱，并能给出信号。此法简便、准确，对进样量的要求不十分严格。 仪器与试剂 仪器：安捷伦1200高效液相色谱仪；紫外吸收监测器（DAD）；柱C18，15cm×4.6cm；。 流动相：甲醇/水＝90/10。 试剂：甲醇（色谱纯）；二次蒸馏水；萘、联苯、菲（标准液）。 实验步骤 按操作说明书使色谱仪正常运转，并将实验条件调节如下： 柱温：室温； 流动相流速：1.0ml/min； 监测器工作波长：254nm 在基线平直后，注入纯样5.0μl，记下各组分保留时间。 注入混合样品5.0μl，记下保留时间。重复2次。 实验结束后按照要求关好仪器。 结果处理 确定未知样中各组分出峰次序。 求取各组分的绝对校正因子。 求取样品中各组分的百分含量。 六、思考题 观察分离所得的色谱图，解释不同组分之间分离差别的原因； 说明紫外吸收检测器工作原理； 高效液相色谱柱可以在一般的室温条件下进行分离，而气相色谱柱则必须恒温，为什么？