云南师范大学化学化工学院实验教学中心典型教学案例简介.PDFVIP

云南师范大学化学化工学院实验教学中心 典型教学案例简介 目录 一、典型教学案例视频文件1 Ⅰ.高效液相色谱法简介…………………………………………………1 二、典型教学案例视频文件2 Ⅰ.恒沸温度和恒沸组成的测定…………………………………………7 三、典型教学案例视频文件3 Ⅰ. 简单蒸馏和分馏……………………………………………………8 高效液相色谱法简介 主讲：郑萍(副教授) 液相色谱分析是在经典的液体柱色谱基础上，引入了气相色谱的理论；在技术上 采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，实现了分析速度快、分离效率高和操 作自动化，这种柱色谱技术被称做高效液相色谱法。 在C18柱中，三组分混合物流出色谱柱的顺序为：萘，联二苯、蒽。 当试样混合物进入色谱柱后，就在固定相和流动相之间不断地进行分配平衡。不 同的化合物，分子结构不同，存在理化性质的差异，所以在两相中存在的浓度也各不 相同。固定相中存在量多的化合物，冲洗出柱子的时间就长，反之则短。这与分配系 数有关： K = 化合物在固定相中的浓度C 固 化合物在流动相中的浓度C流 K值小，先流出柱子，K值大的，保留作用强，后流出柱子。 1 1-1 高效液相色谱法的特点 一 高压 液相色谱以液体作为流动相（称为载液），液体流经色谱柱时，受到的阻力较大， 为了能迅速地通过色谱柱，必须对载液施加高压。在现代液体色谱中供液压力和进样 压力都很高，一般可达到150～300kg ／cm2，甚至可达700k ／cm2 以上。 二 高速 高效液相色谱所需的分析时间较之经典液体色谱快得多，一般可达l—10mL ／ min ， 个别可高达100mL ／min 以上，这已近似于气相色谱的流速。 三 高效 气相色谱的分离效能很高，高效液相色谱的柱效则更高，一般约可达 60000理论 塔板／米； 四 高灵敏度 紫外检测器的最小检测量可达毫微克数量级(10-9 g) ；荧光检测器的灵敏度 2 可达10-11g。高效液相色谱的高灵敏度还表现在所需试样很少；微升数量级的样品就 足以进行全分析。 1-2 高效液相色谱流程和设备 高效液相色谱仪一般可分为5个主要部分：高压输液系统，进样系统，分离系统和 检测系统。此外还配有辅助装置：如梯度淋洗，自动进样及数据处理等。其工作过程 如下： 首先高压泵将贮液器中流动相溶剂经过进样器送入色谱柱，然后从控制器的出口 流出。当注入欲分离的样品时，流经进样器贮液器的流动相将样品同时带入色谱柱进 行分离，然后依先后顺序进入检测器，记录仪将检测器送出的信号记录下来，由此得 到液相色谱图。 1-3 高效液相色谱的定性和定量分析 一 定性分析 3 在液相色谱中保留值定性的方法主要是用直接与已知标准物对照的方法。当未知 峰的保留值（t R ′或V R ′ ）与某一已知标准物完全相同时，则未知峰可能与此已 知标准物是同一物质，特别是在改变色谱柱或改变洗脱液的组成时，未知峰的保留值 与已知标准物的保留值仍能完全相同，则可以基本上认定未知峰与标准物是同一物质。 二 定量分析 HPLC色谱定量的基本方法有内标法、外标法等。 外标法———标准曲线法 是一种简便、快速的绝对定量方法（归一化法则是相对定量方法）。首先用欲测 组分的标准样品绘制标准工作曲线。 1-4 高效液相色谱的应用 目前已普及于几乎所有重要的分析学科领域和许多科研生产部门，高效液相色谱 能较理想地分离和分析与生物医学有关的大分子和离子型物质，易变质的天然产物， 各种高分子化合物和不稳定化合物。 例如：蛋白质、核酸、氨基酸、多糖、颜料极性类脂肪化合物