高效液相色谱法测定双丹水提液中丹参素含量.docVIP

高效液相色谱法测定双丹水提液中丹参素含量摘要：目的：采用高效液相色谱法测定双丹水提液中丹参素的含量。方法：色谱柱：Agilent cIl(250mm×4.65ttm)；流动相：甲醇一l％冰醋酸；流速：lmL／min；温度为室温；检测波长：280nm。结果：线性方程为y=12183x－0.8623(r=O.9998)，线性范围：20.8－208(tw／mL)。结论：该法操作简便，精确度高，可靠性强，可作为丹参和复方丹参制剂质量控制的标准。 关键词：高效液相色谱法：双丹水提液；丹参素；舍量测定 中图分类号.R284.2 文献标识码：A　文章编号：1673－7717(2008)01－0143－02 双丹水提液方由丹参、牡丹皮组成，具有活血化瘀、通脉之功效，用于血瘀胸痹、冠心病、高血压见以上证候者。方中君药丹参的化学成分根据其理化性质和药理作用的差异，可将之分为水溶性成分和脂溶性成分。丹参水溶性成分含有多种酚酸类化合物，该类成分具有很强的抗脂质过氧化、抗血栓等作用，可能是双丹方中的主要活性部分，这其中以丹参素为典型代表。本文建立了高效液相色谱法测定双丹水提液中丹参素的含量，方法简便，安全，灵敏，准确。 1　仪器与试药 1.1　仪器高效液相色谱仪：Agilentll00系列四元梯度泵、Agi]entll00手动进样器，Agilcntll00系列一极管阵列检测器，A0lentll00工作站(Agilent公司)；超声波清洗器；1／10000电r分析天平(沈阳龙腾电r称量仪器有限公司)。 1.2　试剂甲醇(色谱纯，天津四友化学试剂公司)；水为双蒸水；冰醋酸(分析纯，汕头陇西化工厂)；丹参素钠对照品(中国药品生物制品检定所)。 2　方法与结果 2.1　色谱条件色谱柱：Agilent C18(250ram×4.65tm)柱；流速：ImL／min；温度为室温；检测波长：280nm。流动相：A(甲醇)、B(1％冰醋酸)梯度洗脱系统。见表1。 2.2　对照品溶液的制备精密称取丹参素钠对照品5.2mg置于5mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，得1.04mg／mL的对照品溶液。 2.3　双丹水提液的制备参照2005年版《药典》的方法提取，取丹参600g，牡丹皮300g。以上二味，牡丹皮蒸馏，蒸馏液另起器收集。药渣和丹参加水煎煮2次，第1次2h，第2次1h，合并煎液，滤过，浓缩至相对密度为1.15(60℃)的清膏，加乙醇使含醇量达60％，混匀，冷藏24h，滤过。滤液回收乙醇至相对密度1.15(60℃)的清膏，加入牡丹皮蒸馏液和水至900mL，混匀，冷藏备用。 2.4　线性关系　精密称取丹参素钠对照品5.2mg(相当于丹参素4.68rag)置于5mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取对照品溶液0.1、0.2,0.3、0.5、0.6、0.7、0.8、lmL于5mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，得每mL含丹参素钠20.8、41.6、62.4、104.0、124.8、145.6、166.4、208.0p.g系列标准品溶液。分别精密吸取系列标准品溶液20ul注入色谱仪，记录色谱图，以浓度为横坐标，以丹参素钠峰面积为纵坐标进行线性回归，得线性方程Y=12183X－0.8623(r=0.9998)。 2.5　精密度实验精密吸取对照品溶液20ul，连续进样5次，测定峰面积，RSD=0.35％(n=5)。 2.6　重现性实验精密吸取同一批双丹水提液提取液的供试品溶液20ttL，连续进样5次，测定峰面积，RSD=1.5％(n=5)。 2.7　回收率实验精密量取5份已测定含量的同批双丹水提液0.5mL，加入每1mL含丹参素104ug的水溶液O.5mL，摇匀制成5份供试液，分别进样20uL，测定峰面积，计算回收率，丹参素的平均回收率99.22％，RSD为1.35％。见表2。 2.8　样品含量测定精密量取按2.3项下制备的双丹水提液0.5mL于5mL容量瓶中，加水稀释至刻度，微孔滤膜过滤，重复进样5次，记录丹参素峰面积，根据标准曲线计算浓度。见表3。 3　讨论 笔者在方法建立时曾尝试用固定洗脱进行含量测定，但双丹提取液中成分复杂无法达到有效分离，改用梯度洗脱后各峰分离良好，且对丹参素峰无干扰。实验结果表明.本方法重现性好，回收率高，可用于成分复杂的丹参及其复方制剂的含量测定。 丹参素为水溶性成分，笔者在实验中发现它在甲醇中溶解少，文献用甲醇做溶剂，实验结果偏低，可能与其在甲醇中溶解度低有关。本实验采用水做溶剂，结果表明丹参素在水中溶解良好。对含量测定无影响。 1