OxLDL和oxHDL对ECV304内皮细胞TLR2和TLR4表达影响及其对人单核细胞趋化作用变化.pdfVIP

目的 观察oxLDL ，oxHDL 对ECV304 人脐静脉内皮细胞膜上TLR2、TLR4 受体表达 的影响，以及人脐静脉内皮细胞TLR2、TLR4 受到这两种脂蛋白刺激后对THP-1 趋化作用的改变。 方法 每次实验前24 小时，给ECV304 内皮细胞换新鲜培养基培养后加处理因素。用 不同浓度（0 mg/L ，25 mg/L ，50 mg/L，100 mg/L）的oxLDL 和oxHDL 孵育ECV304 内皮细胞24 小时后，用RT-PCR 的方法检测细胞TLR2 和TLR4 mRNA 表达的 水平，筛选出最适的处理浓度。用该浓度处理ECV304 内皮细胞24 小时后，用 RT-PCR 的方法检测细胞TLR2 和TLR4 mRNA 表达的水平，用Western blot 的 方法检测TLR2 和TLR4 蛋白表达水平。将ECV304 内皮细胞种于Transwell 下 室后，用最适浓度的oxLDL 和oxHDL 处理内皮细胞24 小时，然后在上室种THP-1 单核细胞，计数下室的THP-1 单核细胞。将ECV304 内皮细胞种于Transwell 下 室后，用最适浓度的oxLDL 和oxHDL 处理内皮细胞24 小时，用5µmol/LEGCG 孵育内皮细胞1 小时，抑制其TLRs 信号后，再将THP-1 细胞种到上室然后，计 数下室的THP-1 单核细胞，观察THP-1 单核细胞趋化的情况。 结果 用不同浓度的（0 mg/L ，25 mg/L ，50 mg/L，100 mg/L）的oxLDL 和oxHDL 孵育ECV304 内皮细胞24 小时后，ECV304 内皮细胞上TLR2 和TLR4 mRNA 表达随处理浓度的升高增强。在100 mg/L oxLDL 和100 mg/L oxHDL 的作用下， ECV304 内皮细胞上TLR2 和TLR4 mRNA 和蛋白表达水平明显上调。将ECV304 内皮细胞种植到transwell 下室并用oxLDL 和oxHDL 处理细胞后， ECV304 内 皮细胞对THP-1 单核细胞的趋化作用明显增强。当用5µmol/L EGCG 抑制TLRs 信号途径后，内皮细胞对THP-1 单核细胞的这种趋化作用却明显减弱。 8 结论 （1） 在人ECV304 内皮细胞上存在有TLR2和TLR4基因的表达； （2 ） oxLDL和oxHDL可以上调ECV304 内皮细胞TLR2和TLR4 的mRNA和蛋 白质的表达； （3 ） oxLDL和oxHDL刺激ECV304 内皮细胞上TLR2和TLR4表达以后可以促 进人ECV304 内皮细胞对人THP-1单核细胞的趋化作用，并且这一作用可 以被EGCG所抑制。 关键词 动脉粥样硬化；固有免疫；Toll样受体；ECV304 内皮细胞；THP-1单 核细胞；氧化低密度脂蛋白；氧化高密度脂蛋白 9 The Effects of OxLDL and OxHDL in Regulating Expression of TLR2 and TLR4 on ECV304 Endothelial cell and changes on human monocyte chemotaxis ABSTRACT BACGROUND It has become evident that atherosclerosis is an inflammatory disease with immune responses during initiation and progression of this disease. The innate immune response is the first line of defense and is limited to