棉花黄萎病菌毒素的分离提纯.PDF

维普资讯 第19卷 第1期 西北农业大学学报 Vo1．I9 No．1 1991年3月 ActaUniv．Asric．Boreali——occidentalis M arch 1991 棉花黄萎病菌毒素的分离提纯 及致萎活性测定 一 甘 莉 吕金殿 陕【西省植物保护研究所) 擒 薹 经超滤，Con．A-Scpharos~ 4B亲和层折 ，从棉花黄菱病菌的c盟pck 培养 。 液中．分离纯化致萎毒索．戚分分析和致萎悟性测定结果表明：棉花黄萎病菌产生的毒隶是一 种致萎力极强的糖蛋 白。其吉精量为 14．74％．蛋白质量为85．26％．其致萎活力是半纯化灌的 1O～15倍，括力回收为 76％． ． 关键词 棉花．黄萎病菌，致萎毒索。糖蛋白，Con．A-SophBrOS~41]亲和层析 中圈分类号 S435．62]．24；Q503 为明确植物病原菌分泌的致病毒素的化学组成及性质，7O年代以来，人们对不同 的植物病原葡毒索进行 了分离纯化 l【‘。对棉花黄萎病菌致萎毒素的分离纯化及其化学 组成和性质，提出了不同的见解．1970年苏联 B．H鲁诺夫和T．N鲍罗金用有机溶剂淬 取法提取了一种着色的羟肟酸化合物．I972年 Musscll用 ScphadxG-75从病菌的分泌 物中按分子量大小，分离出5种蛋 白质毒素成份|】1。I972 1982年美 国的kccn等采用 DEAE-纤绯素阴离子交换层析、琼脂梧凝胶过滤．从病茼培养液中分离纯化了具毒索 性质的蛋白质——脂多糖复合物H’51~I984年我们采用超滤 的方法分离得到了主要为蛋 白质的粗毒素 (也含有脂，多糖) ，I985年又采用 Con．A-Scpharosc4B亲和层析 从粗毒素中纯化出一种具强致萎力的糖蛋 白毒素，致萎力比粗毒提高 l0～I5倍，而弃 液和其它蛋 白质对棉花几乎无致萎力，经多次再复，分离物成分分析和致萎活性溯定， 证明该方法是一种简便有效的分离棉花黄萎病茼致萎毒素的方法。 l 材料与方法 、 1．1 材料 供试棉花黄萎病茼(Verticilliumdahliae)由泾阳县三 村 自然病娅痛株分离所得 致 萎活性测定所用棉花品种为 86-1． 1。2 方法 1．2．1 病菌培养 将 PDA斜面的棉花黄萎病荫转接到 1OOmolCzapeks培养液中， 25℃振荡培养 15d． 1、2、2 粗提 病萧培养液倒人布 氏湘斗，抽气碱压过滤，收集滤液并经 1500g离心 15rain．去沉淀。上清液经微孔膜(孔径0．45,am)超压 (1kg／cm )过滤，显微镜检查无 文稿l{5副【 日期：I990-．-05-16 维普资讯 50 西北农业大学学报 l9卷 体后。装入超滤器 内．用孔径 l5A 。截留分子量 1万以上的超滤膜，外加高纯氮气超 压(3kg／cm)电磁震动过滤。浓缩 100倍．将超滤所得浓缩液经 15O00r／rain(0℃’离 心 1h，上清液装入透析袋 内．磁力 拌透析 ，每 3h换 1次缓冲液 (O，05otol／L Tri~：-HC1pH7．5)，查无so：，上清液备用． 1．2，3 用 Con．A—Scpharosc亲和层折纯化致萎毒紊糖蛋 白 参照赵永芳等的方法m． 翁 崭 制成 的 Con．A-Scpharos~ 4B亲和吸附剂装柱．用 pH7．5豹平衡液 0【．05otol／L