微生物检验复习提纲.doc

微生物复习提纲 常用培养基的制备、消毒 培养基的分类P90 培养基配制P211 （1）计算 根据配方计算出实验中各种药品所需要的量，然后再分别称量。 （2）称量 准确称取各种成分。一些不易称量的成分如牛肉膏，可用玻璃棒取出放称量纸（或小烧杯）称量。 （3）溶解 向烧杯内加入合适的水量，将牛肉膏、蛋白胨、氯化钠等用水洗下后加热搅拌至全溶后，再加入琼脂进行溶解，最后补足水量。 （4）调pH值 用酸度计或精密pH试纸测定其pH值，并用NaOH或HCl标准溶液调至所需pH值，必要时用滤纸或脱脂棉过滤。一般比要求的pH高出0.2，因为高压蒸汽灭菌后，pH常降低。 （5）分装 根据不同需要，可将配好的培养基分装入配有棉塞的试管或三角瓶内。注意分装时避免培养基挂在瓶口或管口上引起杂菌污染。如液体培养基，应装试管高度的1/4左右；固体培养基装试管高度的1/5左右；装入三角瓶的量以三角瓶容量的一半为限。 （6）包扎 试管扎成捆。试管和三角瓶的棉塞外用硫酸纸或牛皮纸包扎，纸上标明培养基的名称、配制日期等。 （7）灭菌 培养基用0.1Mpa（121摄氏度）高压蒸汽灭菌15~20min。 3、消毒（高压蒸汽灭菌锅使用） 灭菌方法： 1、加水于灭菌器内到规定的水平面。 2、需灭菌的物品（分装在试管、三角烧瓶中的固、液体培养基），棉塞、硅胶泡沫塞等用防潮纸包好（防止锅内水汽把棉塞淋湿），放入灭菌锅内的套筒中。摆放要疏松，不可太挤，否则阻碍蒸汽流通，影响灭菌效果。 3、将灭菌锅盖旋转，使锅盖向下紧压锅体，切勿漏气。 4、设定灭菌温度和时间：121摄氏度，20分钟； 5、打开放气阀，加热，热蒸汽上升，以排除锅内冷空气，当温度到达100摄氏度左右，关闭放气阀。 6、关闭放气阀后，整个灭菌锅成为密闭状态，而蒸汽又不断增多，这时压力和温度都上升，直至压力表指针达到所需压力时，温度达到121摄氏度，灭菌开始计时，通过调节热源，维持此压力到所需时间。7、灭菌完毕，待压力自然降至0时，打开放气阀，注意不能打开过早，否则突然降压致使培养基冲腾，使棉塞、硅胶泡沫塞沾污，甚至冲出容器以外。 8、打开灭菌锅盖，取出已灭菌的器皿及培养基。 9、灭菌锅用完后，将锅内剩余的水倒掉，以免日久产生水垢。 二、其他灭菌和消毒方法P104 消毒：是用物理、化学或生物的方法杀死病原微生物的过程。 灭菌：是指杀灭物体中或物体上的所有微生物（包括病原微生物和非病原微生物）的繁殖体和芽孢的过程。 灭菌的方法分为物理灭菌法和化学灭菌法。 物理方法： 干热灭菌法 ①灼烧灭菌法： 利用火焰直接把微生物烧死。此法彻底可靠，灭菌迅速，但易焚毁物品，使用范围有限，只适合于接种针、环、试管口及不能用的污染物品或实验动物尸体等的灭菌。 ②干热空气灭菌法： 把待灭菌的物品均匀的放入烘箱中，150~170℃，恒温1~2小时即可。此法适用于玻璃器皿、金属用具等的消毒。 湿热灭菌法 在相同的温度下，湿热灭菌的效果比干热灭菌好。这是因为，细胞内蛋白质含水量高，容易变性；高温水蒸气对蛋白质有高度的穿透力，从而加速蛋白质变性而迅速死亡。 ①巴氏消毒法： 既保持食物的营养和风味，又进行了消毒，保证了食品卫生。主要有两种方法：第一种是在63℃下，30分钟消毒；第二种是在75℃下保持15秒。 ②煮沸消毒法： 直接将要消毒的物品放入清水中，煮沸15分钟，即可杀死细菌的全部营养细胞和部分芽孢。 ③间歇灭菌法： 将待灭菌的物品加热至80~100℃，15~30分钟，杀死其中的营养体。然后冷却，放入37 ℃恒温箱中过夜，然残留的芽孢萌发成营养体。第2天再重复以上步骤，如此进行3次左右，就可以达到灭菌的目的。 ④高压蒸汽灭菌法： 实验室最常用的一种方法。是把待灭菌的物品放在一个可密闭的高压蒸汽灭菌锅内进行，以大量蒸汽使其中压力升高。在蒸汽压力达到103.4KPA时，水蒸气的温度可达到121 ℃，微生物（包括芽孢）在15~20分钟内便会被杀死，而达到灭菌的目的。 化学方法： 一般化学药剂无法杀死所有的微生物，只能杀死其中的病原微生物，只能其消毒剂的作用。 能迅速杀灭病原微生物的药物，称为消毒剂；能抑制或阻止微生物生长繁殖的药物，称为防腐剂。常见的有酸、碱、盐、氧化剂、其他有机物等。 三、无菌操作技术 培养基经过高压蒸汽灭菌后，用经过灭菌的工具，在无菌条件下，移接含菌材料于培养基上的过程。 斜面接种时的无菌操作 (1)接种灭菌 (2)开启棉塞 (3)管口灭菌 (4)挑起菌苔 (5)接种 (6)塞好棉塞 注意：无菌操作注意事项！！！ 四、食品中菌落总数的测定（GB4789.2-2010） 是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后，所得1g或1mL检样中形成的细菌菌落总数。以 CFU/g（mL）来表示。 操作步骤： (一)??